Unión y Estabilidad del Complejo CMH/Péptidos, Provenientes de Proteínas Conservadas de los Cuatro Serotipos del Virus del Dengue
Rodríguez V.1, Bonelo A.2, Herrera S.2, González J.M.1
1 Departamento de Microbiología y Grupo de Inmunobiología, Facultad de Ciencias, Pontificia Universidad Javeriana,
Bogotá
2 Instituto de Inmunología, Universidad del Valle, Cali.
Correo electrónico: vivianar@javeriana.edu.co
Desde la descripción en 1991 por Falk y sus colaboradores de las secuencias de anclaje presentes en los péptidos con potencial de unión a moléculas del Complejo Mayor de Histocompatibilidad (CMH). Se ha aplicado esta técnica de “inmunología reversa” para la selección de posibles epítopes inductores de la respuesta de linfocitos T.
En la actualidad, para la selección de epítopes citotóxicos no solamente se utilizan péptidos con longitud adecuada (9 a 10 a.a.) y la presencia de los sitios de anclaje (L/M posición 2 y V/L posición 9 ó 10 para HLA-A*0201). Si no que también se tiene en cuenta la presencia de residuos que favorecen o desfavorecen el anclaje e igualmente su posible sitio de corte por el proteasoma.
Modelo de virus del dengue
En este estudio se selecionó el modelo de virus del dengue para estudiar la respuesta T CD8+, ya que se conoce poco el papel de la respuesta inmune celular.
El objetivo general es determinar la presencia de secuencias peptídicas cortas derivadas de proteínas de los cuatro serotipos del virus del dengue como potenciales epítopes citotóxicos.
Secuencias de cuatro cepas prototipo del virus del dengue
Se seleccionaron las secuencias de cuatro cepas prototipo del virus del dengue, Cepa Singapur-1, Cepa Jamaica-2, Cepa-3 y Cepa-4, se buscaron motivos de unión para la molécula de clase I : HLA-A*0201 y sitios de clivajes proteasómicos.
Se sintetizaron 8 péptidos de 9 a.a. provenientes de la Helicasa (NS3), Polimerasa (NS5), Envoltura (E). Los péptidos virales sintéticos fueron evaluados in vitro para determinar su unión y estabilidad a moléculas de HLA-A*0201, utilizando la línea celular lifoblastoide denominada T2.
Posteriormente, la expresión en superficie del complejo péptido-HLA se determinó por medio de citometría de flujo con la ayuda de un anticuerpo que reconoce el dominio alfa-3 de la molécula de HLA-A2. Seis péptidos seleccionados no mostraron unión a moléculas de HLA-A*0201 en la línea celular T2 en comparación con el péptido MP-Flu 58-66. Péptido reconocido epítope para este subtipo del HLA-A2.Dos péptidos presentaron una afinidad relativa de unión a moléculas de HLA-A*0201 de 0.25 y 0.62. Con una estabilidad de los complejos de 5 horas y 3 horas respectivamente. Interesantemente, a pesar de que los 8 péptidos mostraron los motivos de anclaje, sólo 2 péptidos presentaron unión al CMH.
Estos resultados implican que probablemente las secuencias conservadas no son presentadas y por tanto no inducirían respuesta celular. Lo cual sería otro posible mecanismo de evasión de la respuesta inmune por parte de los virus.
La capacidad de estas secuencias de inducir linfocitos T CD8+ será evaluada por medio de ELISPOT para IFNy.
Importancia de la Proteína Rev del Virus de Inmunodeficiencia Humana Tipo 1 en la Inhibición de la Replicación en las Células Murinas
Marques Sandra1, Veyrune Jean-Luc1, Shukla Ram1, Urcuqui Silvio2, Kumar Ajit1, Velilla Paula2-3
1 Centro Médico Universidad George Washington
2 Grupo de inmunovirología-Biogenesis Facultad de Medicina Universidad de Antioquia
3 Bacterióloga, Joven Investigador de Colciencias
Correo electrónico: usilvio@medic
Entre los obstáculos que existen para entender la infección y la respuesta inmune por el HIV-1 es la ausencia de modelos animales que permitan estudiar la patogénesis del SIDA.
Modelos murinos han sido desarrollados, pero carecen de replicación productiva a largo término. Debido a que la glicoproteína de envoltura de HIV-1 no se une al receptor CD4 ni al correceptor CCR5 murino o porque la transcripción directa del LTR de HIV-1 es ineficiente. Debido a una actividad atenuada de Tat, que es rescatada por la ciclina T1 humana.
La coexpresión de CD4, CCR5 humanas en el cultivo de las células murinas permiten la entrada del virus sin viremia detectable.
En animales transgénicos que expresan la ciclina T1 se observa un bloqueo post-transcripcional que afecta la replicación.
Teniendo en cuenta que Rev es fundamental en el ciclo replicativo de HIV-1, un bloqueo de su actividad explicaría la ausencia de replicación del virus en las células murinas.
Objetivo
Evaluar y caracterizar el dominio de Rev implicado en el bloqueo de la replicación del HIV 1 en las células murinas.
Metodología
Las células A9 se cotransfectaron con las construcciones pRSVRev, pRSVRev1-79, pRSVCRev, pRSVRex79-95, y el gen reportero pCMV128, para determinar el dominio de Rev implicado en el bloqueo de su función. Por microscopía confocal se determinó la localización de Rev.
Resultados
Se demuestra que en las células A9 la función de Rev está restringida, pero es recuperada utilizando la proteína Rev-Rex o pRSVCRev con Rev. Sugiriendo que el dominio C-terminal es importante.
Nuestros resultados muestran que Rev se localiza en el citoplasma después del tratamiento de las células A9 con cicloheximida y actinomicina D.
Conclusiones
Nuestros resultados sugieren la existencia de mecanismos diferentes a la exportación implicados en la disminución de la replicación viral. Que podrían estar asociados a modificaciones post-transcripcionales que involucren inestabilidad de Rev o degradación de transcriptos virales en el citoplasma del huésped.
Determinar la naturaleza de los factores del huésped murino responsable del bloqueo funcional de Rev son fundamentales para el desarrollo de un modelo murino.
Antigenicidad de las Proteínas Recombinantes pvs25 y pvs28 de Plasmodium Vivax
Cifuentes C.1, Stowers A.2, Herrera S.1
1 Instituto de Inmunología, Universidad del Valle.
2 National Institute of Health, MVDV. United States.
Las vacunas bloqueadoras de la transmisión (TBVs) son una estrategia para el control de la malaria. Mediante la cual nuevos ciclos sexuales en el mosquito son inhibidos por anticuerpos humanos dirigidos contra antígenos presentes en esta fase de desarrollo del parásito.
Las moléculas blanco de una TBV son aquellas expresadas por los estadios sexuales de los parásitos (gametocitos, gametos, cigotes, ooquinetos, ooquistes) o por los órganos digestivos del mosquito.
Las proteínas del ooquineto de P. falciparum PfS25 y PfS28 se han propuesto como candidatos a vacuna muy promisorios. En P. vivax se ha logrado clonar sus proteínas análogas PvS25 y PvS28.
El objetivo del presente trabajo es evaluar la antigenicidad experimental y natural de las proteínas del ooquineto PvS25 y PvS28 en habitantes de regiones de Colombia endémicas. Para malaria y en monos previamente infectados con Plasmodium. Veinte muestras de humanos naturalmente expuestos a la infección y veinte muestras de monos infectados con P. falciparum y veinte con P. vivax fueron analizadas para determinar la presencia de anticuerpos contra estas proteínas utilizando el método de ELISA.
Este estudio demostró que las proteínas PvS25 y PvS28 son reconocidas por sueros de habitantes de zonas endémicas para malaria. Igualmente, se detectó respuesta de anticuerpos contra estas proteínas de estadios esporogónicos en monos Cebidae infectados experimentalmente con esporozoitos y formas sanguíneas de P. falciparum, P. vivax.
Interesantemente, se observó reconocimiento cruzado entre estas dos especies de Plasmodium ya que las proteínas de P. vivax fueron reconocidas por sueros de monos infectados con P. falciparum.
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