Regulación de la Localización de las Proteínas de Choque Térmico (HSP70s) por Citocinas en la Línea Tumoral K562
Barreto A.1, Barrera G. 2, González J.M. 1 y Fiorentino S1.
1 Grupo de Inmunobiología y Departamento de Microbiología, Facultad de Ciencias, Pontificia Universidad Javeriana, Bogotá.
2 Unidad de Microscopía Electrónica, CORPOICA, Bogotá.
Correo electrónico: alfonso.barreto@javeriana.edu.co
Las proteínas de choque térmico (HSPs), reconocidas por su función de chaperona molecular, se han asociado recientemente en procesos de comunicación intercelular en condiciones normales, y bajo ciertas condiciones parecen actuar como señales de peligro que activan el sistema inmune.
Las HSPs se movilizan constantemente en el interior de la célula y su localización determina su función. Sin embargo, los mecanismos que participan en este proceso no han sido bien establecidos.
En este trabajo se evalúo el efecto de la IL-10 e IFN-g en la síntesis y localización celular de las proteínas HSP70 (inducible) y HSC70 (constitutiva) sobre la línea tumoral K562.
La síntesis y localización de la proteína constitutiva e inducible en las células K562 tratadas con los diferentes estímulos, fueron analizadas por western blot (WB), citometría de flujo (FACS) e immunomicroscopía electrónica (IME).
Los análisis por WB a partir de extractos de células cultivadas a 41.8°C durante 3horas 20 minutos y a 37°C por 3 horas, o tratadas con 750 U/ml de IFN-g, 10 ng/ml de IL10 o 1 uM de MG132, muestran un incremento de los niveles de HSP70 pero no de HSC70, en respuesta a todos los estímulos.
Utilizando FACS
Utilizando FACS, se determinó una disminución de la HSC70 en la membrana plasmática en respuesta al tratamiento con choque térmico o con IFN-g.
En contraste, la proteína inducible no presentó cambios notables en la membrana, pero se observó una localización preferencial en el núcleo luego del tratamiento con choque térmico o con IFN-g. La síntesis y localización de HSP y HSC70 parecen estar reguladas por mecanismos diferentes.
El aumento en la localización nuclear de HSP70 podría estar asociado con una función protectora, como ha sido descrito. La disminución de la HSC70 presente sobre la superficie celular podría indicar su liberación (chaperoquina) o internalización (chaperona).
Expresión de los Receptores de Citocinas en Fibroblastos Gingivales Humanos Provenientes de Individuos Sanos y con Agrandamiento Gingival Secundario al Consumo de Fenitoína
González Octavio Alberto1 y González John Mario2
1 Centro de Investigaciones Odontológicas, Facultad de Odontología.
2 Departamento de Microbiología y Grupo de Inmunología, Facultad de Ciencias, Pontificia Universidad Javeriana, Bogotá.
Correo electrónico: oagonzal@javeriana.edu.co
Uno de los efectos colaterales más comunes en pacientes con síndrome convulsivo es el sobreagrandamiento gingival (SAG) secundario al consumo de fenitoína. Aproximadamente el 50% de los pacientes que consumen este medicamento presentan esta patología gingival.
Por lo anterior se han definido dos categorías: «respondedores» para aquellos que desarrollan el SAG y «no respondedores» para quienes no lo presentan. Diversos estudios han implicado al fibroblasto gingival como la célula central en la patogénesis del SAG; no sólo por producir proteínas de la matriz extracelular (MEC) sino también por sintetizar enzimas involucradas en la degradación de la misma.
En este proceso metabólico han sido involucrados algunos factores de crecimiento y citocinas como: IL-1a, TGF-b y TNF-a. Estas citocinas participan en procesos como la inducción de la síntesis de proteínas de la MEC o en el control de su degradación.
El objetivo de este estudio es evaluar la presencia de los receptores para IL-1a, TGF-b y TNF-a en fibroblastos gingivales humanos (FGH) provenientes de individuos sanos y de pacientes con SAG secundario al consumo de fenitoína. FGH fueron obtenidos por explantes de tejido gingival, previo consentimiento informado. Las células fueron mantenidas durante los pases sucesivos en MEM y suero fetal bovino al 10%. Los cultivos fueron seguidos por microscopía de luz para determinar su morfología. Se evaluó la expresión de marcadores como vimentina y CD14 por citometría de flujo.
Incubando los FGH
La evaluación de los receptores en superficie se realizó incubando los FGH con la citocina respectiva marcada con biotina y posteriormente adicionando el conjugado avidina-fluoresceína, para ser leídas por citometría.
Los resultados muestran que los cultivos de FGH después del 4 pase presentan células con morfología típica alargada y con prolongaciones. Estas células fueron positivas para vimentina en citoplasma y CD14 en superficie. Los FGH de pacientes con SAG presentaron mayor tamaño y una expresión más marcada del receptor para TNF-a comparados con los FGH de individuos sanos y no respondedores. La expresión de receptores para IL-1a y TGF-b no mostró diferencias entre los pacientes.
Nuestros resultados demuestran que hay características morfológicas y fenotípicas diferenciales en los FGH de los pacientes con SAG secundario al consumo de fenitoína. La presencia de los receptores para TNF-a indica que esta citocina juega posiblemente un papel importante en el desarrollo de esta patología.
Ha sido demostrado que el TNF-a interviene en la síntesis y degradación del colágeno, así como en la proliferación de los fibroblastos.
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