Respuesta Inmune Humoral

Respuesta Inmune Humoral

RESPUESTA INMUNE HUMORAL MEDIADA POR IgA e IgG CONTRA S.mutans DE NIÑOS EN ETAPA PREDENTAL

González D. Octavio A, García B. Mónica, Gutiérrez R.Sandra M, Jaramillo Lorenza, Rodríguez C. Adriana. Centro de Investigaciones Odontológicas, Facultad de Odontología, Pontificia Universidad Javeriana,
Bogotá, D.C.- Colombia.

Hay una amplia evidencia científica que propone al S.mutans como el principal agente causal de la caries dental. Este estreptococo grampositivo coloniza la superficie dental tempranamente ayudado de proteínas de adhesión, las cuales expresa en su pared (PAc), con la consecuente agregación (mediada en parte por los glucanos solubles e insolubles producto de la actividad enzimática de las GTFs y por las proteínas fijadoras de glucanos GBPs) y producción de ácidos como resultado de su metabolismo, lo que termina con la desmineralización de la superficie dental (caries dental).

¿Cómo el sistema inmune responde contra el S.mutans? Es motivo de diferentes trabajos investigativos, cuyos resultados muestran una amplia controversia. El papel protector de los anticuerpos especialmente de tipo sIgA e IgG en saliva no es claro, por lo menos eso lo demuestra la alta frecuencia de caries dental en la población Colombiana. Sin embargo, diferentes grupos científicos en el mundo han obtenido resultados alentadores en la búsqueda de una vacuna contra la caries dental, basados en la utilización de péptidos sintéticos y proteínas recombinantes de los principales factores de virulencia del S.mutans.

Se ha asociado la presencia de S.mutans por primera vez en la cavidad con la erupción del primer diente temporal aproximadamente a los 6 meses de edad. Durante estos primeros meses de vida el niño tiene un sistema inmune inmaduro, caracterizado por la ausencia de anticuerpos IgA e IgM y niveles relativamente bajos de IgG circulante transmitida por la madre a través de la placenta.

Localmente en la saliva, no hay presencia de anticuerpos de isotipo sIgA, pues es una inmunoglobulina que hasta ahora se encuentra en proceso de maduración por el niño, y debido a que la IgG que se encuentra en la saliva proviene normalmente del fluido gingival, en etapa predental no hay vía de llegada a la cavidad oral de dicho anticuerpo. Por esta razón, los anticuerpos tanto sIgA, IgA e IgG encontrados en la saliva de niños en etapa predental, son transmitidos por la leche materna fundamentalmente.

De los anticuerpos transmitidos por la lactancia, aún no se ha reportado la presencia o no de anticuerpos contra S.mutans en saliva, lo que podría reflejar el grado de protección pasiva contra la colonización de este microorganismo previamente a la erupción del primer diente.

OBJETIVO GENERAL

Conocer los niveles de IgA e IgG salival contra el S.mutans en niños en etapa predental mediante la técnica de ELISA con respecto a la edad y al género.

MATERIALES Y MÉTODOS

Población y Muestra

La población estuvo constituida por los niños que se encontraban en etapa predental y asistían a los programas de lactancia materna y desarrollo del niño sano del Bienestar Social de Bogotá. De esta población se tomó una muestra de 60 niños los cuales fueron divididos en tres grupos de acuerdo a rangos de edad:

– De 0 a 60 días (20 niños)
– De 61 a 120 días (20 niños)
– De 121 a 180 días (20 niños)

OBTENCIÓN DE SALIVA

Previo diligenciamiento del consentimiento informado de los padres, para cada uno de los niños se procedió a evaluar por medio de la Historia Clínica la ausencia de compromiso sistémico, malformaciones congénitas y a recolectar saliva total de forma espontánea con una pipeta Pasteur plástica, la cual fue posteriormente llevada a centrifugación a 10.000 rpm por 15 minutos. El sobrenadante se conservó a – 20 grados centígrados hasta su correspondiente uso. Los niños con dientes erupcionados aunque estuviesen dentro del rango de edad también fueron excluidos del estudio.

CUANTIFICACIÓN DE IGA E IGG EN SALIVA

Se desarrolló por medio de una prueba de ELISA, para la cual se fijaron 100 ml de S.mutans (ATCC – Ref.31989) en cada uno de los pozos diluidos en buffer carbonato (pH : 9,6) a una densidad óptica de 0.4 obtenida por lectura a 630 nm. Posteriormente los pozos fueron incubados por 3 h a 37 grados C y toda la noche a 4 grados C, luego se lavaron tres veces con PBS (pH 7.4) que contenía tween 20 al 0.05% para remover antígenos no ligados. Después del lavado final, 100 ml de leche bovina descremada (10 mg por ml en PBS) se añadió a cada pozo para bloquear sitios no reactivos. Luego 100 ml de cada muestra de saliva centrifugada diluida 1:2 en PBS, se incubó por 1h a 37 grados C. Se lavaron 3 veces con PBS-Tween 20 y se incubaron con anticuerpos anti-IgA e IgG humanas (diluidos 1:2000) marcadas con fosfatasa alcalina por 1h a 37 grados C en cámara húmeda. Después de la acción del sustrato específico (pNPP), la reacción enzima-sustrato se detuvo por la adición de NaOH 1N. Las absorbancias fueron medidas a 405 nm.

RESULTADOS:

Se manejaron las pruebas estadísticas no paramétricas de Kruskal Wallis (a.0.01) y Prueba de Spearman (a.0.05). Se encontró una relación inversamente proporcional entre los niveles de IgA e IgG contra el S.mutans y la edad; es decir, que a mayor edad, se encontraron menores niveles de IgA (1.0130) e IgG (0.5250) dentro del rango de edad de 0 a 180 días. Con respecto al género, de los 60 niños, 37 eran de género femenino y 23 de género masculino. El promedio de IgA en las niñas fue de 1.125 Abs y para el masculino fue de 1.51 Abs. Para la IgG el promedio en el género femenino fue de 0.797 Abs y para el género masculino de 1.073 Abs; observándose que las concentraciones en promedio son mayores para IgA que para IgG. Adicionalmente las concentraciones de estas inmunoglobulinas son mayores en los hombres que en las mujeres.

DISCUSIÓN

El estudio de la respuesta inmune contra microorganismos cariogénicos ha sido enfocado principalmente hacia el conocimiento de la inmunidad mediada por anticuerpos frente al S.mutans. Los anticuerpos implicados en esta respuesta son la IgA secretora, que es producida localmente y se encuentra en la saliva y las inmunoglobulinas A, M y G séricas que llegan a la cavidad oral por extravasación sanguínea a través del fluido crevicular. De este paquete de anticuerpos, la presencia de isotipos específicos contra el S.mutans podría estar asociada a una posible protección futura contra la caries dental, mediante la inhibición de la colonización temprana de este microorganismo.

Las inmunoglobulinas presentes en los primeros 6 meses de vida en la saliva, tienen como fuente principal la lactancia materna mediante la cual el niño adquiere anticuerpos de tipo sIgA, IgA e IgG, que le brindarán un tipo de protección pasiva.

En este estudio se encontró que los niveles de IgA e IgG en saliva de neonatos, disminuían a mayor edad hasta los 180 días, coincidiendo con el momento de erupción de los dientes temporales. Este fenómeno podría estar asociado a la actividad de las enzimas presentes en la saliva, las cuales degradan dichos anticuerpos y otra buena parte terminan en el tracto gastrointestinal y respiratorio.

La disminución más marcada de la IgG que de la IgA en saliva, podría ser explicada por sus características estructurales, pues la IgA es secretada en forma dimérica mediante un acople proporcionado por la cadena J que le confiere mayor resistencia a los ataques enzimáticos, mientras que la IgG se encuentra en forma monomérica, haciéndola más susceptible a su degradación. En otros sistemas mucosales como la mucosa vaginal se ha reportado la presencia de IgG positiva para la cadena J como un mecanismo compensatorio; la presencia de IgG en saliva de neonatos positiva para la cadena J, implicaría un mecanismo diferente de llegada a la cavidad oral de dicha inmunoglobulina al fluido crevicular. Teniendo en cuenta que esta es la única inmunoglobulina que atraviesa la placenta y se encuentra circulante en el neonato, este mecanismo compensatorio podría ser de gran utilidad en el control preventivo de la caries dental mediante una vacuna.

La presencia de mayores niveles de los isotipos estudiados en los hombres que en las mujeres, es un fenómeno que podría a manera de hipótesis, estar dando argumentos adicionales que expliquen la mayor prevalencia de caries en mujeres que en hombres.

Aunque la experimentación animal indica que la inmunización contra la caries dental es posible, aún deben responderse varias preguntas y cumplirse todos los procesos establecidos para su aplicación en seres humanos. Algunas de esas inquietudes se refieren a la seguridad, vía y momento de administración y preparación del antígeno. Este trabajo es una aproximación inicial hacia la comprensión del estado inmunológico local en saliva de niños en etapa predental, cuyo conocimiento resulta fundamental para establecer en un futuro, el momento y la vía de administración de una posible vacuna contra la caries dental.

CONCLUSIONES:

1. Los niveles de IgA e IgG contra S.mutans en saliva disminuyen gradualmente en niños de 0 a 180 días al aumentar la edad.
2. Los niveles de IgA contra S.mutans en saliva, comparados con los de IgG, son mayores en todos los grupos de edad comprendidos entre 0 y 180 días de edad.
3. Se observó que los niveles de IgA e IgG contra S.mutans en saliva son mayores en el género masculino comparados con el género femenino entre los 0 y 180 días de edad.

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