Cuantificación del Factor de Necrosis Tumoral en Tejido Pulpar y Lesiones Periapicales

DISCUSIÓN

agresor (antígeno), se observa la presencia de mediadores químicos los cuales median una serie de mecanismos intercelulares como: comunicación entre célula y célula, activación celular, amplificación de la respuesta inmune facilitando procesos como la quimiotaxis, opsonización y fagocitosis; así mismo, act Dan como agentes mitogénicos y de crecimiento de las células de defensa. Dentro de estos mediadores se encuentran las citoquinas producidas por cierto grupo de células y dentro de éstas se ubica el TNF producido principalmente por los macrófagos activados. Su producción está controlada por varios factores que están a su vez regulando la expresión del gen del TNF. Así mismo la producción de TNF, básicamente se restringe a procesos inmunológicos que conlleven un estímulo por agresión celular (Factores irritativos o infecciosos) produciendo inflamación. Esto concuerda con los resultados de nuestro estudio en el cual, la cuantificación de TNF en pulpas sanas de dientes temporales y permanentes fue de cero con excepción de dos muestras. Esto significa que no hay expresión del gen en pulas clínicamente sanas. Las dos excepciones encontradas puede obedecer a procesos inflamatorios no detectados clínicamente o a un factor de error de muestreo en el desarrollo de la técnica de ELISA.

De acuerdo a los resultados obtenidos en las pulpas con diagnóstico de pulpitis irreversible aguda, no hay ninguna relación entre peso y cantidad de TNF, en su lugar existe una diversidad en la respuesta de las muestras con respecto a la producción de TNF. Lo anterior indica que puede existir una variabilidad en los estadios inflamatorios por heterogeneidad en la expresión del gen. Probablemente la heterogeneidad en la respuesta de la expresión del gen (niveles variados de TNF) se dá por la heterogeneidad en los factores que estimulan dicha expresión genética que son: calidad, número y tiempo de presencia del antígeno que también pueden indicar estadios agudos y crónicos de inflamación.

Así mismo como ocurrió con la pulpitis irreversible aguda en las lesiones apicales no hay relación entre el peso de la muestra y la cantidad de TNF. Sin embargo contrasta con la pulpitis irreversible aguda en que los valores de TNF son menores (3.5 veces menor cantidad) y las diferencias entre las muestras no son tan amplias como en la pulpitis irreversible aguda. Esto es un hallazgo importante pues si se tiene en cuenta que en la lesión apical hay mayor daño tisular y reabsorción de los tejidos duros por activación de osteoclastos a partir de citoquinas como la Interleukina 1 y el TNF, se esperaba que la producción del TNF fuera mayor en esta lesión. Se debe tener en cuenta que este es un tejido granulomatoso de respuesta crónica a un estímulo constante y la expresión del gen del TNF, principalmente se dá, entre muchos otros factores inmunológicos, para generar la respuesta inflamatoria aguda. Esto se comprueba con estudios in vivo e in vitro donde se demuestra que la expresión del gen tiene un proceso de atenuación cuando el antígeno está presente en forma constante. Probablemente este mecanismo de regulación génica está operando en la lesión apical y sea la razón por la cual el TNF se encontró en menores cantidades con respecto al proceso inflamatorio agudo.

Todo esto significa que las células del sistema inmune en la pulpitis irreversible aguda desencadenarán un proceso inflamatorio que induce fenómenos como aumento de vascularización e ingreso de células que contribuyen a combatir la lesión iniciada. En pulpitis irreversible aguda, el TNF es un factor que contribuye, al igual que en otras regiones del organismo, al proceso inflamatorio agudo.

CONCLUSIONES

1. La expresión del gen TNF se dá solamente en procesos inflamatorios agudos.
2. La mayoría de las citoquinas estimulan y modulan la respuesta inmune.
3. El proceso inflamatorio agudo en el tejido pulpar conlleva a la necrosis; si se modula la acción de las citoquinas, se podría disminuir el proceso agudo en la pulpa y se podría prevenir en un alto porcentaje la necrosis.

RECOMENDACIONES

Se debe seguir explorando a nivel experimental el comportamiento del TNF y otras citoquinas en las diferentes patologías de cavidad oral, cuantificar la proteína en lesiones apicales agudas y analizar el proceso de reabsorción modulado pro las citoquinas.

APÉNDICE 1:

Equipos, materiales y reactivos empleados en la recolección y preparación de las muestras de tejido pulpar:

• Pieza de mano de alta velocidad.
• Fresa de Carburo No. 2.
• Mechero
• Sondas barbadas nuevas
• Pinzas algodoneras
• Viales estériles (cápsulas)
• Eppendorff Estériles
• Solución de RPMI
• Nevera
• Balanza de precisión (Chyo Jdpiter C-3-200 MDM).
• PBS (Solución salina buffer de fosfato)
• Azida de sodio (NaN3) al 0.02%, como preservativo
• Tritón x – 100 (T-octyl phenoxipoly-ethoxyethanol) SIGMA Ch. Co
• Homogenizador mecánico de pistilo. Thomas teflón pesthe tissue homogenizers
• Microcentrífuga. Fischer, Micro-centrifuge Model 235A

Equipos, materiales y reactivos utilizados para la Técnica de ELISA:

• Pozos para ELISA de fondo plano, en tiras x 8: EIA – RIA, COSTAR Co
• Marco portapozos de ELISA
• Micropipetas Pipetman de 0-20 ul y de 0.200 ul.
• Pipeta multicanal de 50-300 ul (Finnpippete Digital Multichanel. Lab-Systems)
• Puntas estériles amarillas para las micropipetas
• Cajas plásticas para lavados
• Frascos de vidrio estériles de 5 y 10 ml
• Propipeta
• Cuarto o cámara para incubación
• Lector de ELISA: Hypercon Micro-Reader III. R-300.
• Colagenasa a concentraciones de: 10.000, 1.000, 500, 250, 100 y 50 ngr (nanogramos).
• Proteína A con Fosfatasa Alcalina (ICN, Biochemicals). Sacar 5 ul del stock y adicionar 5 ml.

Soluciones y Buffers para el ELISA:

• PBS
• PBS – Twen. (Buffer de lavado): a 1 lt de PBS, se le agregan 0.5 ml de Twen-20.
• Substrato Buffer para revelar: para 1 lt a 800 ml de agua destilada agregar 97 ml de Diethanolamina; ajustar el pH a 9.8 con HCL 1N, se pueden agregar 0.2 grs de azida de sodio (NaN3) y se completa hasta 1 lt con agua destilada.
• Solución Reveladora: A 10 ml del Buffer para revelado se agrega una pastilla de Paranitrofenil-fosfato PNP. (Phosphatase Substrate tablets SIGMA 104-105).
• Solución Frenadora: NaOH3 molar.

BIBLIOGRAFIA

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