Efecto de la dieta rica en grasa (1%) sobre la aorta y el hígado en conejas ovariectomizadas

II parte

ONATRA W.*1, MENDOZA R.2, LENIS C.3, FORERO G.4, RODRÍGUEZ A.5, PEÑA E.6,
LAVERDE G.7, GALLEGO C.8, ESQUINAS PC.9, ZÚÑIGA M.10, RUIZ AI.11, RÍOS MT.12

Resumen

Introducción. La enfermedad coronaria con la enfermedad cerebrovascular son las entidades que causan mayor morbilidad y mortalidad en el mundo. La ateroesclerosis es una lesión arterial inflamatoria crónica exacerbada por una alteración del metabolismo lipídico y factores de riesgo cardiovascular. Fue interés de los autores evaluar el efecto de una dieta rica en grasa sobre especímenes de aorta e hígado en un modelo animal como la coneja.

Material y Métodos. Se tomaron 20 conejas New Zealand de 2.500 a 3.000 gr de peso, las cuales se dividieron en 4 grupos de 5 cada uno: grupo 1 n = 5 control (C1); grupo 2 n = 5 control + dieta rica en grasa 1% (C+D); grupo 3 ovariectomizadas n = 5 control (O1) y grupo 4 n = 5 con dieta rica en grasa 1% (O+D). Se evaluó por estudio ecográfico la aorta abdominal y al final de las 24 semanas se sacrificó una coneja de cada uno de los 4 grupos, realizándose estudios histológicos de aorta y el hígado. Se utilizó la coloración de hematoxilina eosina, cortes histológicos para alta resolución y una coloración para grasa (Red Fast).

Resultados. Ultrasonido de la aorta: el diámetro de la aorta se incrementó en un 18.40% en las conejas no ovariectomizadas y un 12.83% en las ovariectomizadas.

La intima de los C y los C+D aumentó un 33.33% y entre las O controles y O+D aumentó un 15.38%, 50% menor al comprarla con los controles. La evaluación de la intima entre los C1 y O1 aumentó el diámetro en un 14.72% y el grosor de la intima fue del 33.33%. En los casos de C+O y O+D el diámetro presentó un aumento de 0.33% y la adventicia presentó un aumento de 275.0%. El estudio histológico de la aorta y el hepatocito muestra que las C: presentan un aumento escaso de gránulos de grasa en la intima y en el hepatocito; las C+D: en la aorta se aprecian pequeñas gotas de grasa en la intima con aumento del espesor de la intima (290 u-390 u). En el hígado se observa un proceso inflamatorio con alteraciones hidrópicas moderadas y gotas grasas en su interior; las O: se observan muy pocos cambios en la intima, escasas gotas de lípidos y el diámetro se encuentra ligeramente aumentado (180 u-240 u) en relación con los controles. En el hígado, focos inflamatorios con degeneración hidrópica perilobulillar y grasa pericelular; en las O+D: la aorta demuestra un gran acumulo de grasa pericelular con aumento en el espesor (230 u-360 u) un poco mayor que la C+D, el hepatocito presenta cambios hidrópicos, severa vasculización y marcada reacción grasa perilobulillar.

Conclusión. La dieta rica en grasa (1%) en un modelo como el conejo produce lesiones severas a nivel del endotelio aórtico y el hepatocito, especialmente en las conejas con dieta y en menor proporción en las ooforectomizadas.

Palabras clave: dieta rica en grasa, conejas, aorta, hepatocito.

Abstract

Introduction. Coronary artery disease with cerebrovascular disease are the entities that cause more increased morbidity and mortality in the world. Atherosclerosis is a chronic inflammatory arterial injury exacerbated by an altered lipid metabolism and cardio-vascular risk factors. It was the interests of authors evaluate the effect of a high diet fat on specimen of aorta and liver in an animal model such as the rabbit.

Material and Methods. 20 New Zealand rabbits were taken from 2500 to 3000 kg in weight which were divided into 2 groups: Group I (n = 10) 5 control (C), 5 control-fat diet + 1% (C+D) and group II (n = 10) ovariectomized, 5 control (O) and 5 high-fat diet with 1% (O+D). Was evaluated by ultrasonography the abdominal aorta. At the end of the 24 week was sacrificed a rabbit in each group to carried out histological studies of aorta and liver. Was used hematoxylin eosin staining and histological sections for high resolution and fat stain (Fast-Red)

Results. In ultrasound the diameter of the aorta between the C and C+D grew by 18.40% in the O and O+D was 12.83%. The intima of the C and C+D grew by 33.33% and between O and O+D controls grew by 15.38%. 50% lower when comparing with controls. The evaluation of the intima between the C1 and O1 increased the diameter in a 14.72% and the thickness of the intima was 33.33%. In the case of C+O and O+D the diameter presented an increase of 0.33% and the adventitia was increased for 275.0%. Histology of the aorta and the hepatocyte shows that the C: had a little increase of fat granules in the intima and in the hepatocyte. C+D: the aorta were seen fat droplets in the intima with thickening of the intima (290 u-390 u). In the liver there was an inflammatory process with moderate hydropic changes and fat droplets inside. O: there was very little change in the intima, small lipid droplets and the diameter is slightly increased (180 u-240 u) compared with controls and inflammatory foci in the liver with hydropic degeneration and fat perilobulillar pericellular in relation to controls. O+D: the aorta showed a large accumulation of fat pericellular with increase in thickness (230 u-360 u) are little larger than the C+D, presents hepatocyte hydropic changes, severe vacuolization and fat perilobulillar strong reaction.

Conclusion. The high-fat diet (1%) in a rabbit model produced severe injury to aortic endothelium and the hepatocyte, especially in rabbits with diet and to a lesser extent in the oophorectomised ones.

Key words: high-fat, diet, rabbits, aorta, hepatocyte.

Introducción

Es conocido y está bien documentado que la enfermedad cardiovascular (EC), y específicamente la enfermedad coronaria, es la primera causa de morbilidad y mortalidad en los países desarrollados y algunos en vía de desarrollo, superando las enfermedades infecciosas con un costo que supera los US500 millones al año1,2. Si bien a la presencia de placa arteriosclerótica se le han atribuido la mayoría de los eventos tanto coronarios como cerebrovasculares, no necesariamente es la causante de este resultado. La ateroesclerosis es una lesión arterial inflamatoria crónica exacerbada por una alteración del metabolismo lipídico y los factores de riesgo cardiovascular3,4. Estudios de anatomía patológica postmortem revelan que la ateroesclerosis se inicia muy temprano, casi desde la vida intrauterina, y se presenta en el adulto mayor en diferentes partes de los vasos arteriales; además, que a pesar de existir numerosas placas, algunas pacientes mueren de otras causas5.

Para resolver esta paradoja se han diseñado diferentes estudios clínicos y experimentales, los cuales han mostrado que el infarto del miocardio es debido a ruptura o erosión de la placa inestable más que a la cantidad de la misma, atribuyendo entonces a que sus diferentes elementos constitutivos son los que hacen que una placa sea o no inestable6. En estas condiciones se inicia el análisis de los componentes de la placa, los diferentes elementos internos y externos que puedan estar interviniendo en la misma para su desestabilización.

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1 Correo electrónico: wonatra@gmail.com, celular: 310-2626771, Tels: 6108777-2323656-2876901; MD, MSc, Ginecólogo, Endocrinólogo UN; Profesor titular, Docente investigador, UDCA. 2 MVZ, PhD, Decano de Zootecnia, UDCA. 3 QF. Docente Laboratorio Bioquímica, UDCA. 4. MV, Cirujano, Profesor UDCA. 5 MV, Anestesiólogo, Profesor UDCA. 6 MV, Ecografista, Profesora UDCA. 7 Bacterióloga, Gerente Laboratorio de Investigaciones Hormonales. 8 MV, Patóloga, Profesora UDCA. 9 MV, Patóloga, Fundación Santa Fe. 10 MV, Coordinador Bioterio, Profesor UDCA. 11 MD, MSc., Ginecólogo Endocrinólogo, Epidemiólogo, Profesor titular, Universidad Nacional de Colombia. 12 Estadística UDCA. Institución: Universidad de Ciencias Aplicadas y Ambientales (UDCA). Bogotá.

La mayoría de los estudios aclaratorios iniciales han dependido de los hallazgos de autopsia y de los especímenes de arteriectomia coronaria, ultrasonido cardiovascular y algunos marcadores bioquímicos7. A nivel terapéutico se ha probado el efecto benéfico de las estatinas a nivel de la arquitectura de la placa y algunos de los elementos constitutivos de la misma que de alguna manera contribuyen para la estabilización de la placa8. Para poder entender parte de los complejos mecanismos de la composición de la placa debemos remitirnos a la biología molecular. La calcificación de la media ha sido reproducida experimentalmente con dieta rica en colesterol asociada a una variedad de tratamientos, los cuales incluyen la administración de Vitamina D en ratas9, cerdos10 y conejos11; Vitamina D con nicotina con o sin suplemento de colesterol en ratas12 y conejos13; Vitamina D con deficiencia de magnesio en cerdos14 y conejos con falla renal crónica inducida por cauterización renal15 y Warfarina con o sin Vitamina K en ratas16, evidenciando el papel indirecto que tendría la Vitamina D en la etiopatogenia de la ateroesclerosis.

La dieta rica en grasa tiene efectos metabólicos que fueron descritos en la primera parte (ref) y fue interés de los autores describir los efectos de la dieta rica en grasa (1%) en conejas control y ovariectomizadas en la aorta e hígado mediante estudios ecográficos e histológicos.

Material y métodos

Tipo de Estudio: Estudio experimental en conejas New Zealand con peso de 2.500 a 3.000 g sometidos a una dieta rica en grasa al 1%.

Muestra

Se tomaron 20 Conejas maduras New Zealand de 3.000 g de peso, en condiciones de temperatura 21°C y ciclo normal de día y noche.

Se dividieron en 4 grupos: Grupo A: conejas Control: 1) Dieta normal (C) n = 52). Dieta hiperlipidémica (C+D) n = 5. Grupo B: conejas ovariectomizadas (O): 1) Dieta normal (O) n = 52). Dieta hiperlipidémica (O+D).

Dieta

Se les administró dieta rica en 1% de Colesterol, además de 10% de aceites ricos en ácidos grasos saturados [palma,(A)], monoinsaturados [oliva,(B)] y poliinsaturados [maíz,(C)]23.

Laboratorio

Durante este periodo se tomaron muestras de sangre de la vena central de la oreja en cantidad de 10 mL al inicio tiempo 0 (T0), 12 semanas (T2) y 24 semanas (T3) (Figura 1).

En las instalaciones de la Clínica Veterinaria de la UDCA se les practicó extracción bilateral de la gónada (Ovariectomía) a 10 conejas bajo anestesia general y mediante laparotomía; con los cuidados postoperatorios de acuerdo a las guías existentes para estos casos.

1. Se evaluó semanalmente el peso y el promedio de aumento de cada una de las conejas, se consignó el día de la toma en el tiempo T0 (octubre 2007), T2 (febrero 2008) y T3 (mayo 2008) que fue descrita en un número anterior de esta revista, (2009; 15: 219) así como los efectos metabólicos de la química sanguínea y estradiol.

2. Ultrasonido. Al final de las 24 semanas se realizó un ultrasonido de aorta abdominal en una coneja de cada grupo, utilizando un equipo Aloka prosound a-10 con un trasductor de 13 MHz. Se evaluó el diámetro de la aorta abdominal a 1.5 cm por encima de las arterias renales y se midió el grosor de la adventicia en mm.

3. Anatomía patológica. Al final de las 24 semanas se sacrificó una coneja de cada grupo. Se evidenció aumento de grasa en el tejido celular subcutáneo y peritoneo, especialmente en las conejas que recibieron dieta rica en grasa. Se tomaron muestras representativas de hígado y aorta, los cuales se colocaron en recipientes con formol al 10%. A los especímenes se les realizó estudios con hematoxilina eosina, cortes histológicos para microscopía de alta resolución y coloraciones especiales para grasa (Red Fast).

Manejo estadístico

Por tratarse en esta segunda parte de una descripción de los hallazgos histológicos, sólo se transcriben los hallazgos anatomopatológicos17.

Instrumento de recolección: Los datos se consignaron en un formulario diseñado para tal efecto.

Comité de Bioética

El estudio fue autorizado por el Comité de Bioética Sección Experimentación animal de la UDCA de acuerdo a la normatividad internacional existente en el manejo ético de animales en experimentación.

Resultados

Ultrasonido aórtico

Se hizo estudio de la aorta tanto por el lado derecho como por el lado izquierdo, demostrando que el izquierdo es más confiable en el momento de suministrar los datos. El diámetro entre los controles y C+D fue de 18.40% y en las ovariectomizadas controles y con dieta fue de 12.83%.

En la intima al comparar los controles y los C+D se presenta un aumento del 33.33% y entre las ovariectomizadas controles y con dieta el aumento fue de 15.38%. 50% menor al comprarla con los controles.

En cuanto a la evaluación de la intima entre los C1 y O1, el aumento del diámetro fue del 14.72% y el grosor de la intima fue del 33.33%. En los casos de C+O y O+D el diámetro presentó un aumento de 0.33%, y la adventicia presentó un aumento de 275.0% (Tabla 1).