Inhibición del RAST

Para determinar la reacción cruzada se utilizaron extractos de F. sinensis (preparado como se describe anteriormente), velutina, pennsylvanica, latifolia, americana y Olea europaea (Greer Laboratories, Inc. Lenoir, NC).

Las placas se sensibilizaron igual que para el RAST, 50 mL de un pool de los sueros de los 5 pacientes positivos a F. chinensis por pruebas dérmicas y RAST, diluidos 1:2 se mezclaron con 50 mL de cada uno de los extractos a probar en diferentes concentraciones y se adicionaron a los pozos sensibilizados. Se incubó toda la noche a temperatura ambiente, se lavó con PBS-T y se adicionaron 100 mL de anti IgE humana marcada con 125I.

Después de incubar toda la noche a temperatura ambiente y lavar, la radioactividad se determinó en un contador gamma (28). La inhibición del RAST fue expresada en porcentaje. En una curva semilogarítmica se determinó la concentración de extracto de prueba requerida para inhibir el 50% de la reacción (29-30).

Resultados

Pruebas dérmicas

Para establecer la alergenicidad de los extractos, se hicieron pruebas dérmicas de alergia a 207 pacientes, 20 reaccionaron positivamente al extracto de F. sinensis (9.66%) y 6 fueron positivos al extracto de Cecropia sp (2.9%).

En la Tabla 1 se registran los datos epidemiológicos de las pruebas dérmicas de alergia realizadas. De los pacientes positivos accedieron a la toma de la muestra de sangre: de Fraxinus sinensis seis de veinte y de Cecropia sp cuatro de seis.

(Lea También: Inmunodetección en el Fraxinus Sinensis y Cecropia Sy)

Determinación de IgE específica en Inhibición del RAST

Para confirmar la alergenicidad de los extractos de los granos de polen en estudio, se determinó la IgE específica y se encontró que cinco de las seis muestras de suero obtenidas de pacientes positivos a Fraxinus sinensis fueron positivas para Inhibición del RAST.

El paciente número seis que resultó negativo para el RAST, presentó solo una cruz de positividad en las pruebas dérmicas de alergia. La totalidad de las muestras positivas a Cecropia sp (4) fueron negativas. Los ocho pacientes del grupo control fueron negativos para ambos granos de polen (Tabla 2).

Tabla 1. Porcentaje de positividad a los extractos utilizados en las pruebas dérmicas en los 207 pacientes estudiados. Cada paciente puede presentar positividad a más de un extracto alergénico

Extracto	%	Extracto	%	Extracto	%
Fraxinus sinensis	9. 66	Epitelio de gato	4. 35	Artemisa	12
Cecropia	2. 9	Arracacha	3. 3	Llantén	14. 5
Mezcla pastos	12. 7	Rye grass	8. 3	Ragweed	10
Acacia	19. 1	Alnus sp.	1. 7	Amaranthus sp.	15. 9
Sauce|	8. 21	Mosca	30	D. pteronissinus	60. 4
Epitelio de perro	9. 66	Blue grass	2. 3	Fraxinus americana	12. 1
Chenopodium sp.	12	Alternaria sp.	2. 42	Lana	2. 42
Dermatophagoides	68. 12	Thimoty grass	10. 1	Pollo	7. 94 farinae
Polvo casero	23. 67	Maíz	8	Huevo	7. 2
Mezcla de Hongos	12. 7	Tabaco	1. 59	Trigo	5. 31
Hormodendrum sp	6. 7	Mariscos	20	Soya	4. 35
Eucalipto	7. 25	Lulo	12. 7	Tomate	2. 90
Ciprés	7.73	Blomia	10	Leche	2.42
Cándida	11.3	Camarón	10	Manzana	6
Fresa	4.7	Maní	3.3	Papa criolla	8. 7
Banano	8.7	Guayaba	4.7	Tomate de árbol	9. 3
Naranja	6.7	Arroz	2.7	Curuba	2.6
Chocolate	6	Diente de León	5.8	Aguacate	6.7
Mango	7.3	Cucaracha	17.9	Yuca	7.3
Papa	3.3	Aspergillus sp.	3.86	Papaya	1.7
Café	1.7	Rumex sp.	9.18	Pescado	16
Ajo	1.3	Penicillium sp.	6.28	Fríjol	0.7
Apio	3.3	Bermuda grass	23.8	Arveja	1.3
Zanahoria	2.7	Lenteja	7.3	Mora	0.7
Uva	3.3	Atún	8.7	Piña	2
Carne de res	2	Limón	2	Mandarina	1.3
Azúcar	2.7	Garbanzo	3.3	Maracuyá	2.7
Cebada	4.7	Southern grass	8.7	Mezcla plumas	7.73

 Tabla 2. Resumen comparativo de los resultados de las pruebas dérmicas y la determinación de IgE específica en los pacientes positivos a los granos de polen en estudio. ND: suero no disponible

Pacientes positivos	Pruebas dérmicas	RAST
1	4+	Positivo
2	4+	Positivo
3	4+	Positivo
4	2+	Positivo
5	2+	Positivo
6	1+	Negativo
7	2+	ND
8	2+	ND
9	2+	ND
10	3+	ND
11	4+	ND
12	3+	ND

Fraxinus sinensis: con el sistema SDS-PAGE utilizado, se observaron bandas proteicas en un rango de peso molecular entre 131 y 14 kD (Figura 1).

Cecropia sp.: sólo se observó una banda de peso molecular aproximado de 42 kD.

PM
(KD)

Línea 1: Patrones de PM
Línea 2: Extrato de F. sinensis

Figura 1. Comportamiento electroforético del extracto de F. sinensis bajo condiciones de naturantes.