De Moléculas Clase II del CMH en Macrófagos Murinos Infectados con M. Tuberculosis
G. Vásquez, E. Patiño, L.F. García, L.F. Barrera
Grupo de Inmunología celular e inmunogenética. CIM. Facultad de Medicina. U de Antioquia, Colombia.
1Estudiante, Programa Doctorado
Corporación Ciencias Básicas Biomédicas
Universidad de Antioquia, Colombia.
jvgm@epm.net.co
El Complejo Mayor de Histocompatibilidad (MHC) es un complejo de genes estrechamente relacionados. Localizado en el cromosoma 6 humano (HLA), o el cromosoma 17 murino (H2-I).
La función natural de los polipéptidos codificados por el MHC es la presentación. A través de las denominadas células presentadoras de antígenos (macrófagos, células dendríticas, células B), de péptidos antigenicos a las células T CD4+.
Además de su papel esencial en el reconocimiento de agentes invasores externos, el MHC controla los mecanismos de selección positiva y negativa en el timo.
La pérdida de la regulación apropiada de la expresión de los antígenos (Ags) del MHC tiene como consecuencia la generación de la enfermedad. Y en ciertas circunstancias, la muerte del organismo.
Los análisis de comparación de secuencias de las regiones promotoras de los genes MHC clase II humanos y murinos han mostrado una alta homología entre ellas, lo cual sugiere mecanismos reguladores comunes.
Estudios de la activación transcripcional de estos genes han identificado 4 elementos reguladores esenciales presentes en todos los promotores de los genes clase II estudiados, y denominados W(S), X1, X2, y Y.
Estas cajas son contactadas por sus factores de transcripción respectivos: NFY para el elemento Y, el complejo RFX-5, RFXAP, RFX ANK/B y X2BP, contacta el elemento X, y se postula que la caja W (S, Z) es contactada también por el complejo RFX.
El denominado transactivador de clase II (CIITA):
Que no establece contacto con el DNA, interactúa con los otros factores de transcripción, y con algunos de los componentes del aparato basal de la transcripción.
La expresión de CIITA es inducida por interferón gamma (IFN-), y controla por tanto, la inducibilidad de las moléculas clase II.
La evidencia publicada hasta la fecha indica que infecciones causadas por un número de patógenos intracelulares, incluyendo virus, bacterias, y protozoos, inhiben la expresión de los Ags clase II.
En el caso particular de las infecciones micobacterianas, los mecanismos moleculares que expliquen la inhibición de la expresión de estos Ags en macrófagos infectados apenas se empieza a estudiar.
En nuestro laboratorio, hemos estado investigando, utilizando un modelo in vitro. Las consecuencias de la infección de macrófagos murinos con micobacterias tuberculosis, sobre la expresión de los Ags MHC clase II inducida con IFN-.
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Materiales-Métodos y Resultados
1. La expresión superficial de los Ags clase II fue determinada, en la línea celular de macrófagos murinos B2#4. Por medio de citometría de flujo, utilizando anticuerpos mo-noclonales específicos marcados con isotiocianato de fluo-resceína (FITC) o ficoeritrina (PE).
Los niveles de expresión para los mRNAs de la cadena y fueron estudiados por medio de la técnica de Northern blotting utilizando sondas específicas para la cadena I-A y/o I-A, NF-YA, y GAPDH. Los niveles de expresión de CIITA fueron estudiados por medio de RT-PCR utilizando primers específicos para las regiones codificadoras de CIITA y GAPDH.
2. La inducción superficial de Ags clase II por IFN- fue dependiente de dosis y máxima 18-24 horas después de la estimulación. Estos niveles de expresión fueron disminuidos cuando los macrófagos fueron infectados con M. tuberculosis virulento.
La inhibición de la expresión de los Ags clase II fue dependiente de la dosis de infección e independiente de la viabilidad de las micobacterias. En contraposición, la fagocitosis de partículas fluorescentes de 1 M de diámetro no modificó significativamente la expresión superficial de las moléculas clase II.
3. Los niveles de acumulación de mRNA para las cadenas I-A e I-A también se encontraron disminuidos cuando los macrófagos se infectaron con M. tuberculosis.
Esta disminución también fue, como en el caso de la expresión superficial de los Ags clase II, dependiente de la dosis de infección.
Igualmente, la disminución en los niveles de acumulación del mRNA para las cadenas y causada por la infección con M. tuberculosis. Es paralela a una disminución en los niveles de expresión para CIITA.
Conclusión en la infección de macrófagos murinos con micobacterias
Conjuntamente, estos resultados sugieren que la infección de macrófagos murinos con micobacterias virulentas inhibe la expresión de los antígenos MHC clase II.
Igualmente, nuestros datos sugieren que la reducción en la expresión de estos antígenos podría ser explicada, al menos parcialmente, por la disminución en la expresión de CIITA. Lo cual sugiere que mecanismos transcripcionales serían parcialmente responsbles por la inhición de la expresión de los Ags MHC clase II en macrófagos infectados con M. tuberculosis.
Esta inhibición de la expresión de los antígenos clase II en macrófagos podría explicar parte de las deficiencias en la respuesta celular inmune en los individuos con tuberculosis activa.
