Apoptosis Inducida por Inmunosupresores y su Modulación por Anión Superóxido

D.P. Gil, M.T. Rugeles, P. Patiño, M. Rojas
Laboratorio de Inmunología y Laboratorio Central de Investigaciones,
Facultad de Medicina, Universidad de Antioquia, Medellín, Colombia.
e-mail: dipagileudoramail.com.

Introducción

La ciclosporina A (CsA) y la dexametasona (DXM) son drogas inmunosupresoras que han sido ampliamente utilizadas en la terapia de trasplantes y en el tratamiento de varias alteraciones inmunes. Estudios previos indican que el efecto inmunosupresor de la DXM podría deberse en parte a la inducción de apoptosis en células inmunes, mientras que las evidencias experimentales que asocian la CsA y la inducción de apoptosis en el sistema inmune aún son controversiales. Nuestro objetivo fue determinar si la DXM y la CsA inducían apoptosis en células mononucleares de sangre periférica humana (CMSP) activadas con PHA y si la producción de anión superóxido (O2-) era una de las vías desencadenantes de este fenómeno. Además se evaluó el efecto de dos antioxi-dantes, el ácido ascórbico (AA) y la N-acetilcisteína (NAC) sobre la proliferación, la activación celular, la inducción de apoptosis y la producción de O2-

Materiales y métodos

El efecto de las drogas inmunosupresoras y de los antioxidantes sobre la proliferación celular se evaluó por medio de la técnica de incorporación de timidina tritiada después de cultivar las CMSP durante 72 h. Para determinar el número de células apoptóticas se utilizaron las técnicas de incorporación de bromuro de etidio (hipoloidía) y de TUNEL, que fueron leídas por medio de ci-tometría de flujo. La producción de O2- y la activación celular también se analizaron por medio de citometría de flujo, la primera mediante la oxidación de hidroetidina a bromuro de etidio y la segunda mediante la expresión de CD69.

Resultados

Las concentraciones de DXM y CsA que inhibieron la proliferación en un 80% aproximadamente fueron 1 x 10-7 M y 1 g/ml respectivamente. Con respecto a los antio-xidantes las concentraciones que recuperaron la proliferación en forma significativa fueron 3.1 mM y 1 mM para la NAC y el AA respectivamente. Las CMSP tratadas con DXM o CsA presentaron un aumento significativo de la respuesta apoptótica, la cual aumentó notablemente cuando las células fueron tratadas con los inmunosupresores y activadas poste-riormente con PHA (80% para DXM y 90% para CsA). Una respuesta similar se observó en la producción de O2-: aumentó a 70% para DXM y a 40% para CsA. El tratamiento con AA o NAC previno el aumento de la apoptosis y la produ-cción de O2-. Además, la expresión de CD69 y la respuesta proliferativa de CMSP pretratadas con DXM o CsA y activadas posteriormente fueron parcialmente restauradas por ambos antioxidantes.

Conclusiones

CMSP pretratadas con las drogas inmunosupresoras y estimuladas con PHA sufren apoptosis y aumentan la producción de O2-. La apoptosis inducida por activación en CMSP preincubadas con CsA fue 100% dependiente de la producción de O2-, mientras que la apoptosis inducida por DXM fue parcialmente dependiente de éste, sugiriendo la existencia de otras vías apoptóticas independientes a las inducidas por el O2-. El AA y la NAC inhiben la producción de O2- y consecuentemente previenen la apoptosis inducida por DXM o CsA en CMSP activadas con PHA permitiendo que la activación celular y la respuesta proliferativa sean restauradas parcialmente en el caso de las células pretratadas con CsA.

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