Medicina, Dos Nuevas Técnicas Manuales Rápidas para Antibiogramas Urinarios en 6 a 18 horas

Margaret Ordóñez Smith de Danies*

Resumen

Se estudiaron 694 muestras de orina de las cuales 130 sirvieron para estudiar dos nuevas técnicas manuales para antibiogramas urinarios con orinas de recuentos bacterianos >100.000 UCF/mL. Una se denomina NUEVA TECNICA DIRECTA, y se interpreta después de 6 a 18 horas de recolectada la muestra de orina, teniendo una confiabilidad del 99%. La segunda técnica se titula TECNICA DE ENRIQUECIMIENTO cuyo resultado se da entre 10 a 22 horas con una confiabilidad del 99% (p>0.900) en relación con las lecturas de la técnica estándar de difusión en disco. Con las nuevas técnicas no es necesario esperar al aislamiento bacteriano.

Introducción

Hasta donde llega mi conocimiento es la primera vez que se describen estas nuevas técnicas manuales para antibiogramas urinarios (se realizaron dos para escoger la mejor) y obtener su informe rápido (6 a 18 horas). Al comparar las nuevas técnicas descritas con la técnica estándar de difusión en disco se ahorran de 30 a 40 horas, y el costo del cultivo para el aislamiento bacteriano. Las técnicas que propongo están al alcance económico de todo laboratorio, en especial para los países en donde no tengan equipos sistematizados, por su alto costo. Estas nuevas técnicas son totalmente manuales y además para el paciente tienen la ventaja de que le formulen pronto y a ciencia cierta el antibiótico más eficaz. Nuestras nuevas técnicas sólo se pueden aplicar para recuentos >100.000 UCF/mL, aunque hoy en día los criterios de infección urinaria no son de recuentos tan altos (1, 2, 3, 4,5).

Material y Métodos

Pacientes

Se procesaron muestras de orina tomadas por el paciente o llevadas al laboratorio (consulta externa). A cada persona se le realizó un resumen de su historia clínica para saber si tenían alguna sintomatología de infección urinaria, y/o saber si el paciente estaba tomando alguna droga antimicrobiana.

Muestras de orina

Todas las muestras se procesaron antes de 2 horas de su recolección (1,6, 7), y se les practicó a todas el recuento bacteriano y el examen parcial de orina (8, 9, 10, 11, 12). Para la toma de muestras se recomendó a los pacientes lavarse muy bien los genitales externos y tomar la muestra a mitad de micción (8). No se le indicó baño especial con antiséptico (6, 13), pues se ha comprobado que pueden quedar residuos e inhibir el crecimiento bacteriano. Los frascos donde se recogió la muestra eran estériles, sin ningún líquido preservativo (6, 14). Las muestras de orina no siempre fueron de la primera micción del día.

Control de calidad

Los medios de cultivo utilizados fueron importados y se les realizó su control de calidad bacteriólogico y de esterilidad. Igualmente los sensidiscos fueron utilizados bajo la FDA (Food and Drug Administration) e importados. (15, 16).

Siembra para la cuantificación del urocultivo

Todas las muestras (694 casos) se procesaron de la siguiente manera: para saber su cuantificación se sembraron con asa de 0.01 mL en agar sangre, agar MacConkey, de acuerdo con los métodos estandarizados (1,6,8) y además personalmente incluien la siembra primaria la inoculación en agar CLED (con indicador de Andrade) para el crecimiento de levaduras y detectar cultivos mixtos (17). Se incubaron los cultivos 37°C por 24 horas o 48 horas y en los casos sintomáticos se dejaron hasta tres días.

Técnica estándar de difusión en disco

Siembra de la muestra, recuento e identificación

Para poder aplicar la técnica de sensibilidad antimicrobiana estándar es preciso aislar la bacteria.

Al segundo día se realiza el recuento de colonias e identificación de las bacterias. Cultivos con dos colonias se aislaron la que tenga mayor cuantificación y si tenían tres colonias diferentes se deben descartar y pedir nueva muestra.

Antibiograma estándar

Se realiza en el segundo día, de acuerdo con lo descrito por Bauer y modificado por el NCCLS (Comité Nacional de Estándares de Laboratorio de Estados Unidos) (18,19,20,21). Como varios autores han estudiado otros medios de cultivo (22, 23), lo único diferente de nuestro análisis estándar fue que se realizaron en agar 1so-Sensitest y no en agar Mueller Hinton (Figura 1).

Interpretación del antibiograma (tercer día)

La lectura se hace exactamente a las 18 horas de su incubación y se interpreta según la zona de inhibición, o sea midiendo el diámetro con una reglilla milimétrica la zona o el halo de inhibición, o sea lo que no creció alrededor del sensidisco (l8, 19, 10, 21). Las zonas de inhibición se pueden hacer a las 6 horas (24) para obtener una primera lectura.

Nueva técnica directa

Propongo esta nueva técnica para casos graves, agudos o sea para orina que tenga incontables bacterias en su parcial de orina o cuatro cruces, o cuando una muestra llegue tarde al laboratorio y no sea posible procesarla como se enuncia en el numeral 2.7 (figura 1).

Antibiograma con la nueva técnica directa

El método se realizó de la siguiente manera: se tomaron directamente de la orina 2 asas con asa calibrada de 0.01 mL, y se inocularon en agar 1so- Sensitest. Se sembró en forma masiva con un escobillón estéril y en seguida se colocaron los mismos sensidiscos que se utilizaron en la técnica de enriquecimiento como en la técnica estándar. Se incubó la caja de agar 1so-Sensitest a 37°C durante 18 horas.

Interpretación de la técnica directa (segundo día)

Se lee como en la técnica estándar (2.5.3.) y se reporta el diámetro, cuando se observó bacterias en la zona de inhibición se realizó un Gram y si tenía la misma morfología de la bacteria homogénea se informaba como resistente. En la mayoría de los casos que hubo cultivos mixtos fueron por bacterias saprofíticas tales como difteroides o Staphylococcus epidermidis.

Nueva técnica de enriquecimiento

Para tecnificar este método se realizó primero la estandarización del inóculo en el caldo triptona soya para procesar el antibiograma (ver 3.1). Se observaron los cultivos con diferentes tiempos de incubación: 2, 3 y 4 horas. Se utilizaron a la vez las mismas orinas del numeral 2.6. (Figura 1).

paración técnica antibiogramaComparación técnica antibiograma

Estos inóculos se obtuvieron sembrando 2 asas o sea 0.02 mL de orina en 2 mL del caldo triptona soya en tres diferentes tubos: un tubo se dejó por dos horas, el otro tres horas y el otro tubo por cuatro horas. Cuando estos caldos se dejaron por 6 o más horas, hubo un sobrececimiento; por ello no se recomienda incubar más de 4 horas.

Antibiograma de la nueva técnica de enriquecimiento

Se dejan los tres tubos de caldo triptona soya con orina durante el tiempo de incubación estudiado (2, 3,4 horas); se le hace el antibiograma en el agar 1so- Sensitest como el de la técnica estándar, colocándole los mismos sensidiscos de los numerales 2.5. y 2.6.

Interpretacion de la nueva técnica de enriquecimiento (segundo día).

Se lee como en la técnica estándar (2.5.3.) y se reporta el diámetro, cuando se observó bacterias en la zona de inhibición se realizó un Gram y si tenía la misma morfología de la bacteria homogénea se informaba como resistente. En la mayoría de los casos que hubo cultivos mixtos fueron por bacterias saprofíticas tales como difteroides o Staphylococcus epidermidis.

Programa del computador para conocer las diferencias entre las nuevas técnicas y las estándar

Por los altos costos no se realizaron en todos los casos las dos nuevas técnicas. De las 694 muestras de orina se encontraron 216 muestras con bacteriuria incontable en el parcial de orina. A éstas se les procesaron las nuevas técnicas, y de estos casos 130 crecieron bien para hacer nuestros análisis estadísticos.

En un cuadro se transcribieron las tres lecturas de los diámetros de las zonas de inhibición obtenidos en las pruebas de sensibilidad: directa, enriquecimiento y estándar. Con la nueva técnica de enriquecimiento fue necesario estudiar tres grupos por las diferentes horas de incubación.

Se desarrolló un programa en d-base para obtener las diferencias entre la directa y la estándar y la diferencia entre la de enriquecimiento y la estándar, y la droga antimicrobiana empleada.

Análisis estadísticos

Se realizó el chi-cuadrado (25), se compararon las dos nuevas técnicas y la técnica estándar.


* Directora Científica del Instituto de Microbiología, Apartado 93.151, Bogotá8, Col.

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