Lectura, Cuantificación e Interpretación de la Gota Gruesa en la Malaria

2.6 Lectura, cuantificación e interpretación de la gota gruesa

El tratamiento adecuado para un paciente con malaria depende de la lectura cuidadosa de la gota gruesa. Dicha lectura tiene como objetivos específicos establecer la especie del plasmodium y cuantificar el número de parásitos por microlitro (ul) de sangre, criterios básicos para el tratamiento y control del paciente.

• Determinar el número de parásitos en los campos microscópicos necesarios para contar 100 leucocitos

• Asumiendo una constante nacional de 8.000 leucocitos/ml de sangre en pacientes con malaria, se establece la proporción de parásitos por 100 leucocitos encontrados así: (Lea también: Formulación y preparación de las soluciones en Guía de Atención de la Malaria)

No. de parásitos x 8.000 leucocitos/μl
No. de parásitos/μl de sangre = ______________________________________
100 leucocitos

Se considera positivo para plasmodium cuando se observan las formas parasitarias características. Para el informe de resultados es necesario informar la especie de plasmodium y en el caso especifico de P. falciparum es indispensable anexar el recuento del parasito por microlitro de sangre discriminando por formas encontradas (es importante resaltar que una muestra que presente solo gametocitos de P. falciparum debe ser diagnosticada como positiva aunque al paciente no sea necesario suministrarle tratamiento).

En casos de P. vivax se recomienda realizar el recuento en todos los casos, especialmente si el paciente se encuentra complicado.

En el caso de una malaria mixta (asociación parasitaria), es necesario realizar recuento parasitario informando primero la especie que tenga mayor numero y, luego la que se encuentra subordinada, para el diagnostico de infección mixta es indispensable tener en cuenta los siguientes criterios:

1. Presencia de formas parasitarias de P. vivax y gametocitos de P. falciparum.

2. Predominio de trofozoitos de P. falciparum y escasas formas de P. vivax.

3. Presencia de trofozoitos de P. falciparum y formas de P. vivax en proporciones similares. El diagnostico se realiza estableciendo la cantidad de formas parasitarias compatibles con P. falciparum y con P. vivax, en 100 formas parasitarias observadas.

Si al realizar el recuento se encuentran 40 formas o más, es decir, equivalente a 40% de los trofozoitos compatibles con P. falciparum se puede informar positivo para infección mixta.

Si después de realizar el recuento las proporciones se mantienen equivalentes es necesario llevar el recuento a 200 formas parasitarias, para tal caso debería existir compatibilidad con los trofozoitos de P. falciparum en por lo menos 80 formas para obtener 40%.

Se considera negativo cuando no se observan las formas del parasito en por lo menos 200 campos microscópicos observados.

En parasitemias muy altas cuando no sea posible realizar el hematocrito del paciente, puede contar el numero de leucocitos contra 500 parásitos, como se presenta en la siguiente fórmula:

500 parásitos x 8000 leucocitos/μl
Recuento o densidad parasitaria/μl= ____________________________________
No. leucocitos contados

2.7 Informe de Resultados

Se pueden presentar las siguientes respuestas del examen de una gota gruesa de sangre:

• Negativo
• Positivo para P. vivax
• Positivo para P. malariae
• Positivo para P. falciparum (ej: 20.000 trofozoitos/μl, 200 gametocitos/μl, 80 esquizontes/μl)
• Positivo para P. falciparum (100 trofozoitos/μl y 5 gametocitos/μl).
• Positivo para P. falciparum (200 gametocitos /μl)
• Positivo para infeccion mixta
• P.vivax (16.000 parásitos/μl) y P. falciparum (40 gametocitos/μl).
• Positivo para Infección mixta: P. falciparum (10.000 trofozoitos/μl) y P. vivax (4 trofozoitos/μl)
• Positivo aunque no se puede precisar la especie
• Se sugiere nuevo examen.

(En el contexto nacional no se acepta la utilización del recuento semicuantitativo).

2.8 Extendido de Sangre Periférica

Para un correcto diagnostico de especie de plasmodium de malaria es necesario realizar, además de la gota gruesa, el extendido de sangre periférica en casos en los cuales existan dudas sobre la especie del plasmodium, como también en los casos de parasitemias altas, cuando la cuantificación exacta en gota gruesa se hace difícil. Al igual que la gota gruesa, el examen del frotis es sencillo, rápido, confiable y económico.

2.8.1 Procedimiento

• Marcar la lamina de la misma manera descrita para gota gruesa

• Después de tomar la gota gruesa, presionar el dedo del paciente y colocar una nueva gota de sangre en el extremo de una lamina portaobjetos. Poner en contacto la lámina con la gota, de manera delicada, evitando que la lamina toque el dedo del paciente, guardando el espacio designado para la marca de la lamina

• Para realizar el extendido se debe ayudar de otro portaobjetos: colocar en contacto uno de los extremos de este segundo portaobjetos con la gota de sangre que se acaba de tomar; dejar extender por capilaridad la sangre a lo largo del borde del portaobjetos, y con una inclinación de 30 a 40 grados realizar el frotis a lo largo de la lamina

• Presionar nuevamente y tomar un microhematocrito. En los casos de confirmación de especie no es necesario

• Limpiar el dedo del paciente

• Dejar secar la muestra de sangre a la temperatura ambiente, sobre una superficie plana y libre de polvo

• Limpiar bien la lamina que utilizo para realizar el extendido, para evitar la transferencia de parásitos de una muestra a otra.

• Fijar con metanol

• Colorear con Field, Giemsa o Wright, teniendo en cuenta que el procedimiento para la coloración es igual que para la gota gruesa, solo que el tiempo de coloración es aproximadamente el doble (según estandarización de cada laboratorio o puesto de microscopia)

• Observar al microscopio con objetivo de 10X y 40X; buscar los campos donde los glóbulos rojos se encuentren separados. Proceder a observar con objetivo de 100 x las formas parasitarias características de plasmodium.

2.8.2 Lectura de las Muestras, Cálculos e Interpretación

• Utilizar los campos microscópicos en donde la distribución de los glóbulos rojos sea homogénea y no se encuentren superpuestos, hacia el segundo tercio del extendido. Determinar el número de parásitos por campo y calcular el número de campos necesarios para revisar mínimo 10.000 eritrocitos

• Serian necesarios 33 campos microscópicos si hay 300 eritrocitos por campo

• Determinar el número de parásitos en 10.000 eritrocitos observando 33 campos microscópicos

• Calcular el número de eritrocitos utilizando el hematocrito del paciente.

Para un hematocrito de 40% se estima que el paciente tiene 4.000.000 eritrocitos/ml de sangre

– Recuento en extendido = A x No. de G.R /μl
– A= No. de parásitos en 10.000 G.R
– No. de G.R /μl: Hto x 100.000
– Recuento en extendido = No. de parásitos x Hto x 100.000
__________________________________
10.000 glóbulos rojos

Simplificando la formula

– Recuento = No. de parásitos x Hto x 10

Recuento: No. parásitos/μl de sangre

2.9 Informe de resultados

Se procede en forma igual que para el informe de gota gruesa descrita con anterioridad