REACTIVIDAD DE PROTEÍNAS SALIVALES QUE INTERACTUAN
CON PÉPTIDOS SINTÉTICOS DE LA PROTEÍNA PAc DEL S. mutans.
Lorenza Jaramillo. Centro de Investigaciones Odontológicas, Facultad de Odontología, Pontificia Universidad Javeriana.
Después de mucho tiempo la caries dental, sigue siendo el principal problema de salud oral, con mayor prevalencia en los seres humanos. Actualmente se acepta que la caries dental es una enfermedad de origen bacteriano que afecta los tejidos duros del diente. En la patogénesis de esta enfermedad, durante sus primeras etapas, se destaca la habilidad de muchos microorganismos para acumularse en la placa dental. Estos microorganismos se unen por medio de adhesinas constitutivas a la superficie de los dientes a través de la interacción promovida por los componentes salivares.
Una vez las proteínas salivares se adsorben a las superficies de los dientes, se da lugar a los procesos de adhesión y agregación bacteriana, formando microcolonias o acumulaciones bacterianas. Después de la acumulación bacteriana, ocurre el metabolismo de los azúcares en el interior de la célula bacteriana, aumentando la síntesis de lactato que es excretado de la célula bajando el pH, favoreciendo la subsiguiente desmineralización de las superficies dentales
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Entre los microorganismos que se encuentran en estas acumulaciones, se destaca principalmente el Streptococus mutans, que posee una proteína de superficie comúnmente denominada antígeno proteico de superficie (PAc). Esta proteína está implicada en la adherencia de la bacteria a la película salival unida al esmalte dental. Se ha demostrado que mutantes isogénicos del S. mutans deficientes de esta proteína se unen muy pobremente a las películas salivales in vitro.
La multiplicidad de las interacciones entre las bacterias y los componentes salivares han sido motivo de estudio durante los últimos años, debido a que se ha demostrado que tienen relación con la progresión de la caries. Sin embargo, aún no se ha establecido cuales son las proteínas unidas a las superficies dentales que se asocian a la proteína PAc del S. mutans. Tampoco se ha establecido si la presencia de estas proteínas salivales y/o su concentración, se puedan utilizar para el diagnóstico del avance o del control de la caries.
Por estas razones, en el presente trabajo se ha propuesto evaluar cuales son las proteínas de la película adquirida que se asocian a la proteína PAc, haciendo un estudio in vitro con hidroxilapatíta (HA) y a partir de la toma de muestras de saliva de cuarenta personas que visitan las clínicas de la Facultad de Odontología, divididas en dos grupos de estudio: con y sin experiencia de caries.
Se hizo un estudio preliminar de las proteínas presentes en la saliva completa, separándolas por peso molecular con el uso de la técnica de electroforésis en condiciones denaturantes (SDS-PAGE) y no denaturantes (NATIVE-PAGE), de todas las personas involucradas en el estudio. Obteniéndose bandas de proteínas en un rango de 21 a 170 kDa en la técnica denaturante y de 60 a 600 kDa en la no denaturante.
Se ha logrado también separar las proteínas que forman la película adquirida por medio de la técnica de adsorción de éstas a la HA, para la cual se usó la HA de fabricación en el Centro de Investigaciones Odontológicas de la Pontificia Universidad Javeriana. Las proteínas unidas a la HA, fueron también eludías de ésta y liofilizadas. Las proteínas liofílizadas posteriormente fueron reconstituidas y separadas también por peso molecular en SDS-PAGE y NATIVE-PAGE y se les ha realizado también la transferencia a membranas de nitrocelulosa.
El siguiente paso en esta investigación es someter las proteínas inmovilizadas en las membranas a la interacción con péptidos sintéticos representativos de la proteína PAc del S. mutans para evaluar la capacidad de asociación de las proteínas adsorbidas a la HA con éstos. Los resultados pueden ayudar a establecer si la presencia de la proteínas de la película adquirida, posiblemente se pueda utilizar para él diagnóstico del avance o del control de la caries.
