Obtención y Caracterización de una Igy Anti -Porphyromonas Gingivalis

Castellanos JE, Martínez D, Cely A, Gallego A.

Unidad de Investigación Básica Oral, Facultad de Odontología, Universidad El Bosque, Bogotá D.C., Colombia

Se conoce que la Porphyromonas gingivalis (P.g.) es una de las bacterias que se encuentra con mayor frecuencia en pacientes con enfermedad periodontal y que las técnicas de inmunodiagnóstico se usan de rutina para el diagnóstico, por lo tanto nos propusimos en el presente trabajo producir, purificar y caracterizar un anticuerpo policlonal a partir de huevos puestos por gallinas inmunizadas con esta bacteria. La P.g. cepa 33277 fue obtenida en la ATCC, se cultivó en condiciones de anaerobiosis, se homogenizó y se inmunizaron gallinas. Se hizo la recolección de los huevos y a partir de la yema se hizo un proceso de purificación de las inmunoglobulinas Y (IgY) que fue evaluado cualitativa y cuantitativamente. Usando electroforesis no denaturantes se verificó la presencia y pureza de los anticuerpos, que fue usado posteriormente en pruebas inmunoquímicas (Dot blot, Western blot y ELISA), para evaluar su calidad.

Adicionalmente se uso el anticuerpo obtenido en una prueba de inmunofluorescencia usando muestras obtenidas de placa subgingival de pacientes con enfermedad periodontal. Se encontró un alto rendimiento en el proceso de purificación de la IgY y un excelente patrón de reconocimiento en las pruebas, demostrando alta especificidad y sensibilidad. El examen en el microscopio de fluorescencia fue positivo en 11 de las 14 muestras, correspondientes a pacientes con diagnóstico de periodontitis del adulto activa, las muestras negativas correspondieron a pacientes con terapia previa o con diagnóstico de periodontitis agresiva. Confirmamos en este trabajo que las gallinas son un excelente reemplazo de los conejos con grandes ventajas para la obtención de anticuerpos para diagnóstico, investigación y terapéutica.