Mecanismo Fungicida de Macrófagos Activados con IFN-G contra Conidias de Paracoccidioides Brasiliensis

Papel del Óxido Nítrico

L.E. Cano, A. González, D. Vélez, A. Restrepo
Grupo de Micología Médica y Experimental, Corporación para
Investigaciones Biológicas, CIB, Medellín, Colombia.

La Paracoccidioidomicosis (PCM) es una micosis sistémica restringida a América Latina y producida por el hongo dimórfico Paracoccidioides brasiliensis (Pb). Esta micosis es adquirida por la inhalación de las partículas infectantes (conidias), producida por la forma micelial.

El macrófago (Mq) representa la mejor célula de defensa contra éste patógeno; cuando ésta célula es activada con IFN-g, es capaz de matar el hongo por un mecanismo independiente del oxigeno.

El objetivo de éste trabajo, fue determinar el papel del óxido nítrico (NO) en el mecanismo fungicida ejercido por el Mq contra las conidias del Pb. Utilizamos co-cultivos de Mqs murinos peritoneales activados con 50 U/ml de IFN-g tratados con dife-rentes concentraciones de arginasa (ARG), aminoguanidina (AG) o L-normomonometil-L-arginina (L-NMMA) e infectados con conidias (C) de Pb (radio Mq:C, 10:1). Los cocultivos fueron incubados a 37°C, 5 % de CO2 por 96h.

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Posteriormente, los sobrenandantes fueron retirados para determinar la producción de NO por medio de la reacción de Griess. Las monocapas fueron fijadas, coloreadas y observadas microscopicamente.

El porcentaje de transformación conidia-levadura (C-L) fue determinado contando 200 células intracelulares del hongo. Los Mqs no activados permitieron la transformación C-L en más de un 70% y produjeron niveles basales de NO2 (24 mM).

Adicionalmente, el tratamiento con los diferentes inhibidores del NO utilizados (ARG, AG y L-NMMA) revirtieron éste efecto inhibitorio, al igual que redujeron la producción de NO. Estos resultados demuestran que la muerte de las conidias del Pb por Mqs activados con IFN-g, es a través de la vía L-arginina – NO.