Artículo de Investigación: Estudio de la Amplificación del Oncogén HER2 con Hibridación IN SITU Cromogénica

Uso de Nuevas Metodologías en la Práctica Clínica: Estudio de la Amplificación del Oncogén Her2 con Hibridación In Situ Cromogénica y con Plata (Dual Ish) en el Cáncer de Mama

Luz Fernanda Sua1, Juan Carlos Bravo2, William Franco3

Resumen

Introducción: La determinación del oncogén HER2 es crítica en las pacientes que responderán al anticuerpo monoclonal humanizado Trastuzumab. La técnica de hibridación in situ cromogénica y con plata (Dual ISH) ha sido exitosamente probada en la detección de la amplificación del gen HER2, un importante biomarcador del cáncer de mama que combina las ventajas de la automatización y la microscopía de luz, mejorando el flujo de trabajo en el laboratorio.

Objetivos: verificar si la metodología automatizada de hibridización in situ cromogénica y con plata (Dual ISH) realizada en el equipo Benchmark XT de Ventana® puede ser comparable con la hibridización in situ fluorescente (FISH) en casos de la Fundación Valle del Lili.

Metodología: Previa aprobación del Comité de Ética de la Fundación Valle del Lili, evaluamos un total de 42 casos, encontrando 98.1% con un nivel de concordancia total, tanto de la hibridización in situ fluorescente (FISH) y de la inmunohistoquímica (IHQ) con el ISH Dual. Determinamos un nivel de concordancia del 94.4% en el estudio del nivel de amplificación del gen HER2 por FISH y por ISH Dual. La concordancia entre la determinación de la expresión de la proteína HER2 por IHQ y por ISH Dual fue del 100%. Al evaluar nuestro coeficiente Kappa este fue de 0.97 y nuestro coeficiente de correlación intraclases en referencia con el FISH fue casi perfecto 0.85. Conclusión: nosotros observamos una reducción del tiempo de procesamiento con la técnica Dual ISH al ser una metodología automatizada (Equipo BenchMark XT de Ventana®) cuando la comparamos con el protocolo FISH. La técnica Dual ISH permite la evaluación morfológica y estudia simultáneamente el centrómero del cromosoma 17 y el oncogén HER2. Esta metodología se estudia en el microscopio de luz (60x), es cuantitativa, se puede archivar y se encuentra aprobada por la Administración de Drogas y Alimentos de los Estados Unidos (FDA).

Palabras clave: HER2, hibridización, cáncer de mama

Use of New Methodologies in Clinical Practice: Study With Amplification of Oncogene Her2 With In Situ Chromogenic snd Silver Hybridisation (Ish Dual) In Breast Cancer Abstract Introduction: Determination of HER2 oncogene is critical in patients who will respond to the humanized monoclonal antibody, Trastuzumab. Chromogenic and silver in situ hybridization technique (Dual ISH) has successfully proved to detect HER2 gene amplification, an important breast cáncer biomarker with the combined advantages of automation and light microscopy, thus improving workflow in the laboratory. Objectives: To determine whether the chromogenic and silver in situ hybridization automated methodology (Dual ISH) using XT Ventana Benchmark ® can be comparable with the fluorescent in situ hybridization (FISH) in cases of the Valle del Lili Foundation. Methodology: Prior approval of Ethics Committee of the Valle del Lili Foundation, we evaluated a total of 42 cases, finding 98.1% with a level of total concordance of both fluorescent in situ hybridization (FISH) and immunohistochemistry (IHC), with Dual ISH. We also found 94.4% level of concordance when analysing the level of HER2 gene amplification by FISH and by Dual ISH. The concordance of determination of HER2 protein expression by both IHC and Dual ISH was 100%. Our Kappa coefficient was 0.97 and the intraclass correlation coefficient was a near perfect 0.85, compared with our FISH reference. Conclusion: We observed a reduction in processing time with Dual ISH technique -since this is an automated methodology (using a Window BenchMark XT ® equipment) – when compared with the FISH protocol. Dual ISH technique allows morphological evaluation, simultaneously studying both the centromere of chromosome 17 and HER2 oncogene. This quantitative methodology is carried out with light microscope (60x), it can be filed and is FDA (Food and Drug Administration) approved. Keywords: HERS2, hybridization, breast cáncer

Introducción

La técnica de hibridación in situ cromogénica y con plata (Dual ISH) ha sido exitosamente demostrada para detectar la amplificación del gen HER2, un importante biomarcador del cáncer de mama mediante la combinación de las ventajas de la automatización y la microscopía de luz, mejorando el flujo de trabajo en el laboratorio. (1)

Además de esto, el Dual ISH es una técnica segura, de bajo costo y que también puede ser utilizada en la detección de amplificación de oncogén HER2 en otras enfermedades además del carcinoma de mama (2,3)

La prueba de hibridación in situ cromogénica y con plata (Dual ISH), permite la medición de la cantidad de copias del gen HER2 encontradas en el tejido tumoral mamario. El oncogén HER2 está localizado en el cromosoma 17. Una cantidad excesiva de la proteína producida por el gen se encuentra en algunos tipos de células tumorales, incluyendo las células del cáncer de mama. (2)

La FDA basó la autorización del Dual ISH en un estudio realizado en EE.UU con 510 muestras de tumores de pacientes con cáncer de mama. Este estudio mostró que la prueba fue eficaz en confirmar que la muestra del tumor de un paciente tenía una cantidad de copias del gen HER2 mayor a la normal en el 96% de las muestras de tumores positivos para HER2. (4)

Estudios recientes han observado una excelente correlación entre los resultados obtenidos por Dual ISH y FISH (hibridación in situ fluorescente) (5), con las ventaja de la técnica Dual ISH que puede ser evaluada en conjunto con la morfología; las preparaciones se pueden archivar y el patólogo puede realizar el análisis en un microscopio de luz normal (6,2).

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1 MD. Especialista en Anatomía Patológica y Patología Clínica. Estudiante de Doctorado en Ciencias Biomédicas. Departamento de Patología y Medicina de Laboratorio. Patología Molecular. Fundación Valle del Lili. Universidad ICESI. Facultad de Salud. Cali, Colombia.
2 MD. Especialista en Anatomía Patológica. Jefe del servicio de patología. Departamento de Patología y Medicina de Laboratorio. Patología Molecular. Fundación Valle del Lili. Universidad ICESI. Facultad de Salud. Cali, Colombia.
3 MD. Especialista en Oncología Clínica y Quimioterapia. Unidad de Cáncer. Fundación Valle del Lili. Universidad ICESI. Facultad de Salud. Cali, Colombia.