EVALUACIÓN DE DOS MÉTODOS PARA LA PRESERVACIÓN DE CEPAS DE STREPTOCOCCUS MUTANS.
Chaves M, Gamboa F, Mora A. Centro de Investigaciones Odontológicas
Facultad de Odontología. Pontificia Universidad Javeriana
INTRODUCCIÓN
El propósito de la conservación de microorganismos con fines investigativos es un interés de todo centro de investigación, puesto que permite disponer de cepas inmediatamente para su uso; por esta razón, uno de los objetivos del grupo de Microbiología del CIO es la creación de un cepario de microorganismos orales que puedan ser considerados confiables cuando sean solicitados para cualquier trabajo de investigación, por este motivo para lograr un buen mantenimiento de éstos necesitamos conocer y manejar técnicas adecuadas para su preservación. Para este trabajo seleccionamos dentro de los métodos de preservación a largo plazo el de la liofilización y en los de corto plazo elegimos el de la gelatina.
El método de liofilización utiliza una suspensión de bacterias suspendidas en un medio crioprotector y luego son sometidas a un proceso de secado en el cual el agua es sublimada directamente de un material previamente congelado, lográndose la sublimación del hielo bajo vacío.
El procedimiento para el método de la gelatina es resuspender las bacterias en una pequeña cantidad de caldo de cultivo, se inoculan en un tubo que contiene gelatina en estado líquido, posteriormente estas gotas se solidifican, se secan y se liofilizan.
OBJETIVO GENERAL
Evaluar el efecto de los métodos de preservación en gelatina y liofilización en leche descremada al 20% sobre cepas de Streptococcus mutans.
OBJETIVOS ESPECÍFICOS
1. Determinar la viabilidad de las cepas de Streptococcus mutans preservadas en gelatina y por liofilización durante 16 meses.
2. Evaluar durante 16 meses el comportamiento bioquímico de las cepas de Streptococcus mutans preservadas en gelatina y por liofilización.
3. Analizar el riesgo de contaminación en la preservación en gelatina y liofilización sobre cepas de Streptococcus mutans.
4. Determinar la influencia del tiempo de reconstitución en al recuperación de cepas de Streptococcus mutans.
MATERIALES Y MÉTODOS
Se tomaron 33 cepas de Streptococcus mutans, previamente aisladas e identificadas en el CIO, se repicaron en Agar Sangre y Agar Mitis Salivarius, incubadas a 370 C en ambiente de microaerofilia, de estos cultivos se realizó una suspensión ajustada al patrón 2 de Mc Farland.
Para la realización del método de preservación con gelatina se tomaron 300 ml de las suspensiones y se agregaron 300 ml de gelatina líquida (300 C), de esta mezcla se tomaron 20 ml en micropocillos de ELISA y se sometieron a congelamiento (-400 C por 20 minutos), transcurrido este tiempo se liofilizaron, estos micropocillos se colocaron en eppendorf con sílica gel activada más tapones de algodón, se mantuvieron así hasta el momento de las lecturas.
De la suspensión de Streptococcus mutans se tomaron 100 ml y se mezclaron con 100 ml leche descremada al 20% previamente esterilizada a 116 0 C durante 20 minutos, se colocaron en tubos eppendorf de 2 ml y se llevan a congelación por dos horas, para luego realizar el proceso de liofilización, y se almacenaron hasta el momento de las lecturas.
La reconstitución de las cepas se realizó en 1 ml de caldo nutritivo, incubadas a 370 C en ambiente de CO2, durante 6 y 24 horas, posteriormente sembrados 10 ml en Agar sangre y en Agar mitis salivarius, luego de obtener colonias se procedió a contar las Unidades Formadoras de Colonias (U.F.C) y a realizar las pruebas bioquímicas.
CONCLUSIONES
1. Hasta el momento la liofilización en leche descremada al 20% es mejor que la liofilización en gelatina para la conservación de las cepas de Streptococcus mutans.
2. La liofilización en leche descremada se constituye en un método óptimo y fácil de realizar para la preservación de Streptococcus mutans.
3. La incubación durante 24 horas de la suspensión bacteriana, reconstituida en caldo nutritivo es estadísticamente significativa en comparación con la incubación durante 6 horas.
