Detección de Anticuerpos contra las Proteínas no estructurales del Virus de la Fiebre Aftosa

Resumen

Con el fin de tener información precisa sobre el momento de la detección de los anticuerpos contra los antígenos no estructurales del virus de la Fiebre Aftosa (FA) luego de la infección dos bovinos y un ovino adultos machos libres de anticuerpos contra la enfermedad y negativos a las pruebas de Inmunodifusión y Elecroinmunotransferencia (EITB) fueron inoculados por vía intradermolingual con el virus 01 campos BHK-2 10.000 DICC50 (dosis infectante cultivo celular 50) Los animales fueron sangrados una vez al día durante un mes, con el fin de obtener muestras de fueron para detectar la producción de anticuerpos. Los dos bovinos presentaron lesiones vesiculares en la cavidad oral a alas 24 horas post-inoculación manifestando generalización de las lesiones en los cuatro miembros al día. 4. La detección de los anticuerpos contra los antígenos no estructurales del virus se evidenció en los bovinos a los diez (10) días post-inoculación y entre ellos los contra el antígeno VIA a los once (11) y catorce (14) días. En el ovino se detectaron anticuerpos contra las proteínas no estructurales del virus de la FA a partir del día ocho (8) y contra el antígeno VIA a partir del día noveno (9).

Sánchez Camilo., Pineda Luis Alberto Quintero Myriam., Valbuena Ruth Myriam Respectivamente: DMU, DMV, Microb, Msc., Laboratorio de Enfermedades Vesiculares, Instituto Colombiano Agropecuario ICA

Sumary

Detection Of Antibodies Against Fmdv Non Structural Proteins

In order to have accurate information about the moment when the detection of antibodies against the non structural antigens of the FMDV starts after infection, two bovines and one ovine all male adults free of antibodies againts the disease and negative to inmunodiffusion and EITB were inoculated eith 10.000 DICC50 of the 01 Campos BHK-2 virus.

The animals were bled daily for a month in order to obtain seum for the detection of antibodies. Both bovines presented vesicular lesions in the oral cavity 24 hours post-inoculation and the oviene 3 days post-inoculation, presenting lesions on the 4 extremities on day 4. The antibodies against the non structural antigens of the FMDV in the bovines were detected 8 days post-inoculation and the antibodies against the VIA antigen on fay 9. In the ovine, antibodies against the non structural antigens of the FMDV wew detected on day 8 and against the VIA antigen after day 9.

Introducción

La Fiebre Aftosa (FA) desde su aparición en el país en el año de 1950 constituye una de las enfermedades de mayor impacto económico por las pérdidas directas e indirectas que causa y es una de las enfermedades de control oficial de la División de Sanidad Animal del Instituto Colombiano Agropecuario (ICA), razón por la cual durante la historia del Instituto y con la participación de recursos financieros del Departamento de Agricultura de los EE.UU. se adelantan acciones de prevención, control y erradicación de la enfermedad.

Actualmente el control de la FA está basado en el diagnóstico oportuno, la vigilancia epidemiológica, el control de movilizaciones hacia áreas libres, planes de vacunación, campañas de erradicación y la reciente creación de la ley para la erradicación de la enfermedad.

El diagnóstico de la enfermedad se realiza a partir de muestra de epitelio de animales enfermos con lesiones frescas, las cuales se enfrentan con sueros hiperinmunes contra los virus de la FA tipos A, O, y C. (5,10,12,13,15).

Debido ala similitud de sintomatología entre la EV y la FA es necesario adoptar tecnologías que permitan inferir la actividad viral, razón por la cual el objetivo principal del presente trabajo fue conocer el momento de detección de los anticuerpos contra las proteínas no estructurales del virus de la FA luego de la infección.

Aunque existen varias metodologías par evidenciar la actividad del virus de la FA como son la inmunodifusión (1,2,14) que detecta anticuerpos contra el antígeno VIA (antígeno asociado a la infección viral) la prueba de probang (3,9) para detectar portadores de la enfermedad, la seroneutralización (15) para detectar anticuerpos neutralizantes contra la enfermedad y la electroinmunotransferencia (7,8) para detectar actividad viral entre otras, la muestra indicada para realizar el diagnóstico es la de epitelios preferiblemente de tipo lingual de animales enfermos con lesiones frescas, los cuales por la prueba de fijación del complemento permitirán el diagnóstico diferencial entre Estomatitis Vesicular (EV) y Fiebre Aftosa (FA).

Considerando que el diagnóstico diferencial de las enfermedades vesiculares en Colombia sólo es posible a nivel de laboratorio cada la similitud de sintomatología entre al EV y la FA es necesario adoptar tecnologías que permitan inferir la actividad viral, razón por la cual el objetivo principal del presente trabajo fue conocer el momento de detección de los anticuerpos contra las proteínas no estructurales del virus de al FA luego de la infección. El conocimiento de esta información es de gran utilidad no solo para determinar actividad del virus de la FA sino principalmente para recomendar el momento de la toma de muestras que puedan evidenciar dicha actividad viral. El ensayo inmunoenzimático de electrotransferencia EITB es una prueba de alta sensibilidad y especificidad rápida y de fácil ejecución que identifica de una manera concluyente los animales infectados eliminando los falsos positivos presentes pro la vacunación sistemática de los animales además de ser una prueba inouo debido a que en ninguna etapa de la producción de los antígenos se utiliza virus infectivo y su interpretación no requiere de equipo especial ya que se hace de manera visual. (4, 6. 7, 8, 9, 16).

Materiales y Métodos

Diseño experimental

Dos bovinos identificados como rojo y negro, fueron inoculados por vía intradermolingual con el virus de la FA tipo O. Con el fin de determinar el momento de detección en suero de los anticuerpos contra las proteínas no estructurales del virus fueron obtenidas muestras de suero de cada uno de los animales el día 9 pre-inoculación y diariamente durante los 30 días posteriores a la descarga viral. Con intervalos de 10 días fueron obtenidas muestras de líquidos esofagofaríngeos durante 5 meses post-inoculación. Toda la fase experimental se realizó en unidades de aislamiento, permitiéndole a los bovinos el consumo de agua y alimento a voluntad. De la misma forma un ovino adulto macho identificado con el número 6835 fue inoculado con el mismo virus y sangrado diariamente hasta el día 30 post-inoculación.

Animales de experimentación

Se utilizaron dos bovinos machos, criollos, de 16 meses de edad y un ovino adulto macho, sin historia de vacunación contra fiebre aftosa, libres de anticuerpos contra la enfermedad y negativos a las pruebas inmunodifusión y electroinmunotransferencia utilizadas para detectar anticuerpos contra el antígeno VIA (antígeno asociado a la infección viral) y para detectar actividad del virus de la FA respectivamente.

El ensayo inmunoenzimático de electrotransferencia EIT es una prueba de lata sensibilidad y especificidad, rápida y de fácil ejecución que identifica de una manera concluyente los animales infectados eliminando los falsos positivos presentes por la vacunación sistemática de los animales.

Virus y vía de exposición

Como fuente de infección se utilizó el virus de la FA tipo 01 campos a una dosis de 10.000 DICC50 (dosis infectante cultivo celular 50), el cual fue inoculado por vía intradermolingual.

Obtención de las muestras de suero

Acorde con las fechas consignadas en el diseño experimental, las muestras de sangre para la obtención de los sueros fueron recolectadas mediante el sistema vacutainer, en tubos in aditivo debidamente identificados. Con el fin de favorecer la formación de coágulo los tubos fueron colocados en posición inclinada a 37o durante 20 minutos y posteriormente colocados en refrigeración a 4o C/1 hora, tiempo al cabo del cual se centrifugaron a 2500 rpm/5 minutos. En suero de cada individuo fue depositado en tubos marcados de igual forma que los de la recolección de la sangre y fueron almacenados en congelación hasta su procesamiento(15).