Materiales y Métodos, El Pretratamiento con Alopurinol disminuye la Translocación

Diseño del estudio

Es un experimento controlado en animales. El protocolo de investigación fue elaborado teniendo en cuenta la normatividad y las recomendaciones sobre el manejo de animales de laboratorio45,46, y recibió aprobación por parte del comité de bioética de la Facultad de Ciencias de la Salud de la Universidad de Boyacá.

Sujetos e intervención

Se estudiaron 10 ratas Wistar machos de siete semanas de vida con características que se muestran en la tabla 1. Los animales se dividieron en dos grupos. Ambos fueron alimentados por tres días ad libitum con agua y concentrado, y se mantuvieron en un ciclo día/noche de 12 horas.

El primer grupo fue pretratado con 50 mg/kg diarios de alopurinol por vía oral durante tres días y una hora antes del procedimiento quirúrgico. Ambos grupos se sometieron a laparotomía bajo inducción anestésica por inhalación de éter y mantenimiento con sevoflurano y oxígeno en circuito semiabierto y 5 mg/kg de ketamina intramuscular.

Posteriormente, se practicó la laparotomía con disección de arteria mesentérica superior y ligadura reversible con banda de caucho, por un periodo de 60 minutos. El segmento sometido a isquemia fue el íleon terminal. luego se liberó la ligadura y 60 minutos después se resecó el segmento intestinal sometido a isquemia/re­perfusión y otro segmento control no isquémico.

Se tomó muestra de sangre de la aurícula para el procesamiento de hemocultivos y la pieza anatómica de intestino se envió a análisis histológico al laboratorio de patología. Al terminar el procedimiento, se llevó a cabo eutanasia con cloruro de potasio en dosis letal. Las figuras 1 y 2 muestran imágenes del modelo desarrollado.

Variables de resultado

Se tomaron, como variables primarias, el número de unidades formadoras de colonias en hemocultivos y los cambios histológicos de la mucosa intestinal según la escala de Chiu15.

Según el autor, los cinco grados de lesión de menor a mayor gravedad son los siguientes: grado 0, vellosidad mucosa normal; grado 1, desarrollo del espacio subepitelial de Gruenhagen, usualmente en el ápex de la vellosidad, a menudo con congestión capilar; grado 2, extensión del espacio subepitelial con levantamiento moderado de la capa epitelial a partir de la lámina propia; grado 3, levantamiento epitelial masivo a los lados de la vellosidad, con algún desnudamiento apical; grado 4, desnudamiento de la vellosidad con exposición de lámina propia y capilares dilatados (se puede ver aumento de celularidad en la lámina propia), y grado 5, digestión y desintegración de la lámina propia, con hemorragia y ulceración.

Análisis estadístico

Las diferencias estadísticas entre los grupos fueron evaluadas por medio de la prueba no paramétrica de Mann-Whitney.

Resultados

No se encontraron diferencias entre los grupos según las características antropométricas (tabla 1). La superficie corporal se calculó según la fórmula42 SC=k x peso2/3.

Los resultados de los hemocultivos tomados en cada una de las ratas de ambos grupos se muestran en la tabla 2.

Los hemocultivos fueron positivos en 20 % de los animales pretratados con alopurinol, en comparación con el 100 % de las ratas control. La diferencia fue estadísticamente significativa (p<0,0001).

La tabla 3 muestra los resultados observados en la evaluación microscópica de la mucosa intestinal de acuerdo con la clasificación de Chiu15. Se evidenció un promedio de grado histológico de 2 después del periodo de isquemia y reperfusión para el grupo de alopurinol, en comparación con 3,4 3 y 4 en el grupo control.

Los resultados revelaron que los periodos de 60 minutos de isquemia y 60 minutos de reperfusión, producen lesión profunda en la mucosa intestinal. La administración previa a la injuria de alopurinol redujo significativamente la lesión por isquemia-reperfusión (p<0,001).