Una mirada a los espermatozoides desde la biología reproductiva
Drs. Jesús De Los Ríos, Walter Cardona, Jesús Berdugo y Angela Cadavid
Universidad de Antioquia, Unidad de Urología
Medellín – Colombia
Introducción
La fertilidad masculina se evidencia por la capacidad para embarazar a una mujer, y la femenina por la capacidad de gestar y llevar a término un hijo. En la reproducción suceden numerosos procesos de forma coordinada que tienen que ser tenidos en cuenta ya que alguna alteración en éstos puede llevar a problemas de fertilidad1,2.
Actualmente, el único examen que genera información sobre el estado reproductivo del hombre es el espermograma, en el cual se realiza una descripción de aspectos cualitativos y cuantitativos relacionados con las características espermáticas que tiene el eyaculado como: volumen, pH, motilidad, viabilidad, concentración y morfología.
En los últimos años se aprendió que el espermatozoide es una célula especializada que tiene que sufrir una serie de eventos (capacitación, hiperactivación, reacción acrosomal) antes de fertilizar el oocito3 y se ha observado que espermatozoides con algún defecto en estos eventos pueden ser causa de infertilidad. Debido a este conocimiento apareció el análisis funcional del espermatozoide, con el que se evalúa la ocurrencia de los eventos que suceden antes, durante y después de la fertilización. Entre las pruebas funcionales se pueden mencionar: la reacción acrosomal, la penetración de oocitos de hamster libres de zona pelúcida, el ensayo de hemizona, la prueba de hinchazón de espermatozoides en medio hipo-osmótico y la evaluación de la integridad de la cromatina espermática por tinción con naranja de acridina. Otro procedimiento de laboratorio que estaría midiendo la funcionalidad del espermatozoide en cuanto a su motilidad es la técnica de separación espermática migración-sedimentación.
El objetivo del presente estudio fue evaluar, en un grupo de individuos fértiles, la integridad de la membrana y de la cromatina espermática y las características de los espermatozoides recuperados después de la separación por migración sedimentación, para intentar generar una información más precisa del estado del espermatozoide que le permita al clínico un mejor diagnóstico y tratamiento.
Palabras Claves: Espermatozoide, prueba de hinchazón del espermatozoide, eosina Y, desnaturalización de la cromatina, migración sedimentación.
Materiales y Métodos
Población de estudio: Se analizaron los eyaculados de 111 individuos fértiles de la ciudad de Medellín-Colombia, que habían tenido al menos un hijo en el ultimo año ó su pareja se encontraba en embarazo.
Evaluación de la integridad de la membrana espermática: Se evaluó por la prueba de hinchazón de espermatozoides en medio hipo-osmótico (HOS)4.en la cual se incubaron 100 ul de semen con 1 ml de solución hipo-osmótica durante 1 hora; luego se contaron los espermatozoides que incorporaron la solución (evidenciado por hinchazón de la cola). Otra prueba que también evaluó la integridad de la membrana fue la exclusión del colorante vital eosina-Y5, en la cual se mezcló una gota de semen con una gota de eosina al 1% y se contaron los espermatozoides diferenciando los que tomaron o no el colorante.
Evaluación de la integridad de la cromatina espermática: El porcentaje de espermatozoides con desnaturalización del DNA se determinó mediante la incorporación del colorante naranja de acridina. Los espermatozoides pre y postseparación fueron incubados durante 5 minutos con 6 ug/ml de naranja de acridina (Naranja de Acridina, Sigma chemical Co.), posterior a esta incubación se observaron 100 espermatozoides en el microscopio de fluorescencia. La fluorescencia verde en la cabeza indica DNA de doble cadena y el DNA de cadena simple, que está desnaturalizado emite fluorescencia roja6.
Separación de espermatozoides por migración-sedimentación (M/S, “jumping”): Con esta técnica se recuperan los espermatozoides móviles que migran al compartimiento interno del tubo de Jondet7 Para cada muestra de semen se valoró la motilidad y la concentración antes y después de la separación. La evaluación de la motilidad espermática fue realizada por un observador entrenado según los criterios establecidos por la OMS en 19978, así: motilidad A = progresiva rápida; B = progresiva lenta; C = no progresiva y D = inmóviles; la concentración se determinó mediante el recuento en la cámara Makler y se expresó en millones de espermatozoides por ml.
Análisis estadístico: Se realizó una comparación entre los diferentes grupos generados en los ensayos por una prueba pareada de Wilcoxon (no paramétrica). Para la correlación entre las pruebas se utilizó la correlación de Spearman.
