Determinación Retrospectiva de Marcadores de Células Basales: Material y Método

Material y Método

Selección de casos

Un total de 20 casos de muestras de tejidos de biopsias de próstata del Laboratorio de Patología y Citología de la ciudad de Cartagena diagnosticados como sugestivos de adenocarcinoma o en los que se describencambios atróficos, focos de hiperplasia de células basales o de adenosis sospechosos de lesión tumoral maligna en el mismo laboratorio fueron seleccionados.

Se les realizó coloración de inmunohistoquímica: a cada corte se le aplicó por separado cada uno de los marcadores: 34BE12 y p63,

Inmunohistoquímica

A los nuevos cortes se les realizó coloración de inmunohistoquímica: a cada corte se le aplicó por separado cada uno de los marcadores: 34BE12 y p63. Los anticuerpos monoclonales anti-p63 y 34BE12 fueron utilizados a una dilución de 1:100 (DAKO). Los cortes fueron desparafinados e hidratados, inmersos en buffer de citrato de sodio 10mM, colocados en Olla de Pascal con recuperador antigénico, calentados en micro-ondas por 15 minutos.

Se aplicó el anticuerpo, con incubación del anticuerpo primario a temperatura ambiente por 45 minutos y del anticuerpo secundario a temperatura ambiente por 30 minutos, seguido por la aplicación del cromógeno, los cortes fueron contrastados con hematoxilina.

Evaluación de inmunohistoquímica

La evaluación de las coloraciones de inmunohistoquímica, se hizo con base en la intensidad y distribución de las glándulas inmunopositivas para 34BE12 y p63 como evidencia de presencia de células basales en las mismas

Se valoró la tinción de células basales en todos los casos y se clasificaron de acuerdo a su categoría diagnóstica. Comparándolos con los cortes coloreados con hematoxilinaeosina (HE). Para ambos marcadores la tinción positiva (color marrón) en los focos dudosos se tomó como evidencia de benignidad.

La ausencia de tinción en focos dudosos se tomó como evidencia presuntiva de un proceso maligno siempre que los aspectos morfológicos con HE fuesen compatibles

Se evaluó la presencia de células basales por tinción positiva con los dos marcadores. La reacción se consideró positiva cuando las células mostraron una coloración marrón a nivel nuclear con el p63 o citoplasmático con el anticuerpo 34BE12.

Dificultades en la interpretación

La mayor dificultad fue la desaparición de los focos sospechosos en los nuevos cortes por agotamiento del tejido (50%). Seguida por la falla en la coloración con 34BE12 y p63. Definida como ausencia de un control interno positivo (10%). El pequeño tamaño de los focos sospechosos también produjo dificultades la interpretación de las coloraciones con los anticuerpos (10%).

Resultados

En este estudio se evaluaron 20 muestras de biopsias de próstata que presentaban focos sospechosos diagnosticados como sugestivos de adenocarcinoma, cambios atróficos, focos de hiperplasia de células basales o de adenosis sospechosos de lesión tumoral maligna.

Al excluir los casos en los que la lesión desapareció en los nuevos cortes y los dos en los que la tinción fue negativa con control interno negativo. Se estudiaron los ocho casos en los que fue posible evaluar la lesión sospechosa por inmunohistoquímica, con ambos marcadores (Tabla 2)

La estandarización de la técnica, mostró en la muestra seleccionada, en la mayoría de las glándulas prostáticas benignas tinción intensa en las células basales para ambos anticuerpos, con coloración marrón localizada en el citoplasma para 34BE12 y en el núcleo para p63 (Figura 1).

En algunos cortes se evidenció algo de tinción de fondo a nivel del epitelio glandular, que fue intensa en uno de los casos, sobre todo en la coloración con el marcador p63, (Figura 2). Hubo escasa tinción estromal.

En siete casos, ambas tinciones fueron positivas en las glándulas sospechosas, lo que confirmó el diagnóstico de lesión benigna. En algunos en forma completa y en otros con tinción focal y control interno positivo (Figura 3). Uno de estos casos había sido categorizado como “sugestivo de hiperplasia de células basales”. Al realizar la inmunohistoquímica se confirmó el diagnóstico, al observar positividad para ambos marcadores en el foco sospechoso (Figura 4).

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Comparando la morfología de la lesión en los cortes de rutina

En un caso (Caso 3) CK34BE12 y p63 fueron negativos en la mayoría de las glándulas en el foco atípico (90 a 95%). Con tinción citoplasmática débil focal para CK34BE12 en algunas glándulas, y positivos en las glándulas benignas vecinas, (control interno positivo) lo que sugiere una lesión atípica, de difícil diagnóstico por inmunohistoquímica.

Se revisó nuevamente comparando con la morfología de la lesión en los cortes de rutina. Sin embargo a pesar de esta revisión no se pudo llegar a un diagnóstico conclusivo. Y se considera una lesión atípica cuyas características morfológicas e inmunohistoquímicas no permiten establecer una clasificación diagnóstica precisa. (Figura 5).