Prevalencia de Asma y Rinitis Alérgica en Preescolares de Cali

Resúmenes del Cuarto Congreso Colombiano de Alergia, Asma e Inmunología

Myriam Arévalo, PhD1,2, Marco A. Reyes, MD3, Leonardo E. Victoria, MD1,2,
Constanza Zapata, Bsc1, Marisol Badiel, MD4, Sócrates Herrera, MD1,2
1 Instituto de Inmunología del Valle, Facultad de Salud, Universidad del Valle, Cali, Colombia.
2 Centro Internacional de Vacunas – TMRC, Cali, Colombia.
3 Facultad de Salud, Universidad del Valle, Cali, Colombia.
4 FUNDACIÓN Clínica Valle del Lili, Cali, Colombia

Introducción   :

El asma y la rinitis se han convertido en las patologías alérgicas más prevalentes en la población infantil a escala mundial.

Objetivos:

Determinar la prevalencia de las patologías alérgicas en la ciudad de Cali. Describir el comportamiento epidemiológico de la enfermedad. MÉTODOS: Estudio de corte transversal. Se seleccionó una muestra entre niños preescolares menores de seis años y se aplicó el cuestionario ISSAC.

Resultados :

Se incluyeron 198 niños en el año 2002, la edad promedio fue de 3.3 años, 52.5% eran niños y 106 (53.5%) provenían de estrato social 0-1 y el resto de estrato 4-5. La prevalencia de asma fue del 20.6% y de rinitis alérgica de 18.1% y fue diferente según el estrato: en los de estrato bajo, fue más prevalente el asma 27% vs. 13% comparado con los de estrato alto.

En cambio, en los de estrato alto fue más frecuente la rinitis (29.3% vs. 8.1%, p < 0.001). El antecedente familiar de alergia se presentó en mayor proporción en los niños con asma que con rinitis (40.9% vs. 9.1, p < 0.008). El riesgo de presentar comorbilidades respiratorias fue mayor en los niños con rinitis que con asma (RR = 1.35, p = 0.049). No se encontró asociación entre género, edad, padres fumadores con alguna de las patologías alérgicas.

Conclusiones:

La prevalencia de asma fue del 20.6% y de rinitis de 18.1% en los preescolares de Cali, similar a lo reportado en el Estudio Nacional de Alergias. La teoría de la higiene en nuestro estudio sólo se cumple para la rinitis alérgica.

Programa para la Identificación de Inmunodeficiencias Primarias en Antioquia

Carlos J. Montoya1, Helí Salgado2, María M. Olivares3, José L. Franco4,
Juan A. López5, Julio C. Orrego6, Rubén D. Gómez7, Diana García de O.8, Pablo J. Patiño9.
Grupo de Inmunodeficiencias Primarias, Corporación Biogénesis, Universidad de Antioquia, Medellín.
1 MD, MSc; 2 MD, Pediatra; 3 MD; 4 MD, MSc; 5 Biólogo, MSc;
6 MD, estudiante maestría; 7 MD, MSc; 8 MD, Pediatra, DSc;
9 MD, MSc, DSc.

Introducción:

Con frecuencia el personal de atención en salud se encuentra ante pacientes que presentan infecciones a repetición, generalmente con una severidad mayor de lo común. En sus diferentes manifestaciones, la infección recurrente constituye una situación importante de enfermedad, incapacidad y muerte para la sociedad.

Objetivos:

Este programa pretende evidenciar el síndrome de infección recurrente como un problema de salud importante e identificar aquellos casos de inmunodeficiencia PRIMARIA responsables de una infección recurrente anormal.

Métodos :

Se diseñó un programa para la “Detección y Manejo de Síndrome de Infección Recurrente – SIR”, que establece criterios de selección de pacientes sospechosos de padecer alguna alteración en el sistema inmunológico, el cual se le explicó al personal de salud de las unidades de atención más importantes del departamento de Antioquia. Se desarrollaron protocolos clínicos y de laboratorio para el estudio de los casos que lo ameritaran, y los mecanismos de remisión a un lugar de evaluación.

Resultados :

Entre agosto de 1994 y marzo de 2003, se evaluaron 781 pacientes remitidos desde diferentes unidades de salud del departamento y de algunas ciudades del país, de los cuales 422 (54%) presentaban un verdadero síndrome de infección recurrente anormal. Se lograron diagnosticar 107 casos nuevos de inmunodeficiencias primarias, siendo las deficiencias predominantes de anticuerpos las más frecuentes (42%).

Conclusiones:

Este programa ha permitido caracterizar el síndrome de infección recurrente y detectar tempranamente los pacientes con inmunodeficiencias primarias, con el fin de iniciar un manejo adecuado que permite disminuir el número de infecciones, las hospitalizaciones por esta causa y las secuelas consecuencia de estos procesos.

Modulación de la Muerte de Monocitos Infectados con Mycobacterium Tuberculosis (mtb): Papel del ca2+, la il-10 y las Fosfolipasas y su Correlación con el Crecimiento Intracelular de la Micobacteria

Dulfary Sánchez, Luis F. García, Mauricio Rojas
Grupo de Inmunología Celular e Inmunogenética,
Facultad de Medicina, Universidad de Antioquia, Medellín.
e-mail: d_sanchez02@hotmail.com

Introducción:

La infección con Mycobacterium tuberculosis (Mtb) induce apoptosis en macrófagos dependiente del balance TNFa/IL-10, activa flujos de calcio responsables del daño mitocondrial y regulación del cAMP. En monocitos de pacientes tuberculosos, Mtb induce apoptosis y necrosis, mientras los controles sanos sólo apoptosis, indicando que la muerte podría asociarse con la patogénesis y control de la infección. Sin embargo, los mecanismos de necrosis son desconocidos. Postulamos que en presencia de señales antiapoptóticas de IL-10, el calcio podría activar lipasas y proteasas, diferentes a caspasas, que induzcan necrosis.

Metodología:

Promonocitos U937, diferenciados o no con PMA, infectados o no con Mtb, se trataron con bloqueadores de calcio (BAPTA/AM), inhibidores de cAMP (MDL-1), fosfodiesterasas (pentoxifilina) y fosfolipasa-A2 (DEDA) y agonistas de cAMP (dbcAMP). Citofluorométricamente se evaluó el daño mitocondrial y de membrana plasmática por tinción con DIOC6/BE y el porcentaje de células IL-10+ y TNFa+, el crecimiento micobacteriano por incorporación de 3H-UdR.

Resultados y Discusión:

La infección micobacteriana indujo apoptosis en células U937 diferenciadas y no diferenciadas, necrosis sólo en células no diferenciadas. El aumento del cAMP y las fosfodiesterasas correlacionó con el porcentaje de células IL-10+, la necrosis y el crecimiento intracelular de Mtb, sin afectar el porcentaje de células TNFa+. La inhibición de PLA2 bloqueó la necrosis, indicando que ésta depende de la activación de PLA2 dependientes de calcio. CONCLUSIÓN: En células U937, el cAMP aumentó la producción de IL-10, que antagoniza la apoptosis inducida por TNFa, pero la presencia de señales concomitantes de calcio activó PLA2 favoreciendo la necrosis.

Proyecto financiado por Colciencias código: 1115-04-11957.

Aislamiento y Caracterización de Lipoproteínas de Mycobacterium Tuberculosis H37Rv con Capacidad de Inducir la Apoptosis de Promonocitos Hhumanos U937

Maria E. Maldonado, Mauricio Rojas, Luis F. García, Blanca L. Ortiz
Grupo de Inmunología Celular e Inmunogenética. Facultad de Medicina, Universidad de Antioquia. Medellín
mariaele@quimbaya.udea.edu.co

Introducción:

Las lipoproteínas microbianas activan diferentes mecanismos en la célula hospedera, como la apoptosis, una forma de muerte celular que se caracteriza por despolarización mitocondrial, activación de caspasas y endonucleasas.

Objetivos:

Purificar lipoproteínas de la envoltura de Mycobacterium tuberculosis H37Rv y evaluar su capacidad de modular apoptosis de promonocitos humanos de la línea U937.

Métodos :

Extracción de lipoproteínas de la envoltura de Mycobacterium tuberculosis H37Rv mediante partición en fase. Purificación por electrofóresis preparativa. Identificación y caracterización con anticuerpos e isoelectroenfoque. Evaluación citofluorométrica de apoptosis con DIOC6 y de necrosis con Bromuro de Etidio en células U937.

Resultados :

En la fracción detergente del sonicado se encontraron proteínas entre 16 y 75 kDa. Se formaron 4 grupos: 19-22, 23-28, 29–32, 33-40 kDa, dentro de las cuales se identificaron por Western blot lipoproteínas de 19 y 38 kDa. Lipoproteínas de aproximadamente 33 y 37 kDa, con punto isoeléctrico entre 7.00-8.00, indujeron apoptosis; células productoras de TNF-a más que de IL-10, activación de caspasas 1 y 3, pero no se observó necrosis. Estas fracciones parecen requerir receptores scavenger para inducir apoptosis, ya que su actividad se inhibió con lipoproteína de baja densidad acetilada.

Conclusiones:

Lipoproteínas de la envoltura celular de Mycobacterium tuberculosis H37Rv de aproximadamente 33 y 37 kDa y PI entre 7.00-8.00, indujeron daño mitocondrial, producción de TNF-a y activación de caspasas en promonocitos humanos, con participación de receptores scavenger. Estos resultados deben validarse en monocitos de sangre periférica y macrófagos tisulares, y la vía de señalización definirse claramente.

Financiado por la FUNDACIÓN para la Promoción de la Investigación y la Tecnología.

Estudio de la inhibición de la función de la proteína Rev de VIH-1 por la proteína celular NF90

María E. Castaño1 Silvio Urcuqui2
Grupo de Inmunovirología, Corporación BIOGÉNESIS, Facultad de Medicina, Universidad de Antioquia.
1 Estudiante de Maestría, Posgrado en Ciencias Básicas Biomédicas
2Profesor, Facultad de Medicina, Universidad de Antioquia

Introducción:

La proteína Rev del VIH-1 participa en la regulación de la expresión del genoma viral, siendo responsable de la translocación núcleo citoplasma de los transcriptos. NF90 es una proteína celular codificada por el gen ilf-3 localizado en el cromosoma 19 humano, que interactúa con la estructura Tar de VIH-1. En células de mamíferos, se demostró que NF90 inhibe o activa la transcripción de un gen dependiendo del promotor y estabiliza el mRNA de IL-2. En células GHOST(3)CXCR4 que expresan NF90 e infectadas con HIV-1, se presenta disminución de la replicación viral.

Objetivos:

Determinar el efecto de NF90 en la inhibición de la actividad de exportación de Rev, y si es el caso, determinar los dominios de NF90 implicados en dicho proceso.

Métodos :

Células HeLa se cotransfectaron con pCMV128 (gen reportero CAT), pRSV-Rev (expresa Rev) y Flag-NF90 o pCI-neo-NF90 (expresan NF90 o sus diferentes regiones); el extracto celular se utilizó para los ensayos de CAT e inmunoprecipitación. Para estudiar la localización celular, celulas HeLa fueron cotransfectadas con GFP-NF90 y pRSV-Rev o Flag-NF90 y GFP-Rev.

Resultados :

NF90 es capaz de bloquear la actividad de exportación de Rev, según la expresión de CAT y de alterar su localización celular. También se observó que existe una interacción NF90-Rev según los resultados de inmunoprecipitación.

Conclusiones:

Se demostró que NF90 disminuye la actividad de exportación de Rev, posiblemente alterando su localización celular o a traves de la interacción NF90-Rev. Esto podría explicar la inhibición en la replicación de VIH-1 observada por otros investigadores.

Reconocimiento de Proteínas de Superficie de Cigotos y Ooquinetos de P. Vivax por Individuos Expuestos e Inmunogenicidad en Monos Aotus

María F. Yasnot1, Myriam Arévalo1,3, Adriana Rincón1, Yesid Solarte1, p>
Angélica Castellanos.3, Anthony Stowers4, Carole Long4, Sócrates Herrera1,2
1Instituto de Inmunología del Valle, Universidad del Valle, Cali, Colombia.
2Centro Internacional de Vacunas – TMRC.
3Fundación Centro de Primates, Cali, Colombia./span>
4National Institute of Allergy and Infectious Diseases,
National Intitutes of Health, Bethesda, MD.

Introducción:

El bloqueo del ciclo esporogónico es un estrategia importante en el control de malaria
(Vacuna Bloqueadora de la Transmisión). Las poblaciones más favorecidas con esta vacuna son las que habitan en áreas de baja o mediana endemicidad, viajeros y militares. En P. vivax se han identificado dos proteínas como potenciales moléculas blanco para el desarrollo de vacunas, Pvs25 y Pvs28, que se expresan en cigotos y ooquinetos.

Objetivos:

El presente estudio está dirigido a evaluar la presencia de anticuerpos contra estas proteínas en sueros de individuos infectados y no infectados de la Costa Pacífica Colombiana y determinar su inmunogenicidad en monos Aotus.

Metodología:

Inicialmente se estandarizó la prueba de ALIMENTACIÓN artificial por membrana de A. albimanus para evaluar el bloqueo de la transmisión por la presencia o ausencia de ooquistes al 7° día post-infección. La determinación de anticuerpos se realizó por pruebas de IFAT, ELISA y Western blot.

Resultados:

Bloqueos entre 90-100% se consideraron significativos. Los resultados demuestran que de un total de 76 muestras de pacientes infectados 76.5 % presentaron actividad bloqueadora de la transmisión. Los títulos de anticuerpos variaron entre 1:100 a 1:800.

Adicionalmente, en 100 sueros de individuos no infectados, el 90% reconocieron la proteína rPv25 y el 77% la rPv28. La proteína rPv25 producida en condiciones GMP fue inmunogénica con títulos de anticuerpos entre1:1000 y 1:10000 presentes hasta el día 150 y con actividad bloqueadora.

Conclusiones:

En conclusión, sueros de pacientes expuestos a malaria tienen actividad bloqueadora de la trasmisión y los candidatos a vacuna son inmunogénicos en monos Aotus.

Marcadores de Superficie en Monocitos de Pacientes con Tuberculosis: Comparación entre Diferentes Formas Clínicas, Seguimiento Durante el Tratamiento y Efecto de la Infeccion in Vitro con M. Tuberculosis H37Rv

Yoenis García, María D. Sánchez, Carlos Montes, Sara C. París, Mauricio A. Arias,
Luis Fernando Barrera, Mauricio Rojas y Luis F. García.
Grupo de Inmunología Celular e Inmunogenética, Facultad de Medicina, Universidad de Antioquia

Introducción:

En la respuesta innata a Mycobacterium tuberculosis (Mtb) participan los receptores CD14, tipo Toll (TLRs), manosa (RM) y “Scavenger” (CD36 y CD163). Expresados por monocitos/macrófagos. En la inmunidad adquirida son esenciales la presentación antigénica mediada por MHC II y las señales mediadas por CD40 e IFNgR. Alteraciones en la expresión de estas moléculas pueden estar implicadas en la patogénesis de la tuberculosis (TB).

Objetivos:

1. Determinar la expresión superficial de CD14, CD36, CD163, HLA-DR, RM, IFNgR1 y TLR2; antes y durante el tratamiento antituberculoso,
2. Determinar el efecto de la infección in vitro con Mtb sobre la expresión de estos marcadores.

Metodología:

Mediante citometría de flujo se determinó la expresión de receptores en monocitos circulantes y monocapas de monocitos infectados o no con Mtb, obtenidos de controles tuberculino positivos y pacientes con TB (pulmonar, pleural y miliar), en diferentes estadios de tratamiento.

Resultados:

En pacientes con TB se encontró un aumento en el porcentaje de monocitos CD14+ y una disminución del porcentaje de monocitos CD36+ y HLA-DR+. El tratamiento antituberculoso resultó en la recuperación de los valores normales de expresión. Los demás marcadores no presentaron diferencias con respecto a los controles. La infección in vitro con Mtb indujo una disminución en la expresión de CD14, MR, HLA-DR y CD36.

Conclusiones:

En la TB hay alteraciones en la expresión de moléculas críticas en la inmunidad innata (CD36, RM, CD14) y adquirida (HLA-DR), las cuales pueden deberse a la carga bacilar presente en la TB activa.

Proyecto financiado por Colciencias código: 1115-04-11957.

Análisis del sistema NADPH oxidasa de las células fagocíticas por medio de un sistema heterólogo de células

Augusto A. Arias1, Jiabin Ding2, Mary C. Dinauer3, Juan D. Matute1, Pablo J. Patiño1.
1 Grupo de Inmunodeficiencias Primarias, Corporación Biogénesis, Universidad de Antioquia, Medellín, Antioquia, Colombia.
2 Department of Immunology, Genetech Inc., South San Francisco, CA, USA.
3 Departments of Pediatric Research (Hematology/Oncology) Wells Center for Pediatric Research, Indiana University School of Medicine, Indianapólis, IN, USA.

Introducción:

El sistema NADPH oxidasa de las células fagocíticas es un complejo multiproteico importante en la función antimicrobiana de dichas células, gracias a la puesta en marcha de la explosión respiratoria. Para su activación, las proteínas citosólicas p67phox, p47phox, p40phox y Rac2 se unen al flavocitocromo b558 membranal, induciendo la producción de anión superóxido, precursor de agentes microbicidas oxidantes. Mutaciones en varias de estas proteínas del sistema causan una inmunodeficiencia PRIMARIA conocida como la enfermedad granulomatosa crónica.

Objetivos:

Evaluar algunas mutaciones y polimorfismos en el gen de la p67phox mediante su expresión en el sistema heterólogo de células COSphox.

Metodología:

Se generaron mutaciones en el cDNA de p67phox por mutagénesis sitio-dirigida. El cDNA mutante y silvestre fue transfectado transitoriamente en células COS-7 que expresaban gp91phox, p22phox y p47phox como transgenes estables. Se evaluó la expresión de la proteína codificada por el cDNA transfectado por western blot y la actividad del sistema NADPH oxidasa por reducción del NBT en placa y cinética cuantitativa de reducción del citocromo c.

Resultados y Conclusiones:

1. Los residuos Lys19, Lys20 y Asp21 de la p67phox son indispensables para la activación del sistema oxidasa,
2. El extremo C-terminal de esta proteína (residuos 398-526) no es necesario para la actividad del sistema NADPH en las células COSphox .
3. Los cambios Val166®Ile, Pro329®Ser y His389®Gln causados por polimorfismos no alteran el funcionamiento de la p67phox. Estos hallazgos permiten avanzar en el conocimiento de los mecanismos moleculares por los que la p67phox regula el sistema oxidasa.