Reacción en Cadena por la Polimerasa (PCR)

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Guillermo Gómez Jurado.
Profesor Universidad de La Salle

Para algunos colegas, en especial los que se encuentran trabajando con técnicas de laboratorio esta prueba es suficientemente conocida, pero reiteramos que el principal objetivo de nuestra columna Sabe o Recuerda, es el de llevar nuevas informaciones a otros profesionales que no tienen acceso a informaciones científicas, ni la oportunidad de encontrarse vinculados a publicaciones técnicas.

Encuesta sobre Vehículos en Colombia 🚘 🛣️

¡Bienvenido(a)!

Gracias por participar en esta encuesta. Su opinión es muy valiosa para conocer la percepción que tienen los consumidores sobre diferentes marcas de vehículos en Colombia. La encuesta es anónima y sus respuestas serán utilizadas únicamente con fines de investigación de mercado.

⏰ Duración estimada: 5 minutos.

Por favor, responda con sinceridad.

1. Ciudad de residencia*

Si no aparece su ciudad, por favor especifique cuál. 

1. Ciudad de residencia*

Si no aparece su ciudad, por favor especifique cuál. 

2. Género   *

2. Género   *

3. Edad*

3. Edad*

4. Estrato socioeconómico (NSE)*

4. Estrato socioeconómico (NSE)*

5. ¿Cuál es la primera marca que viene a su mente cuando piensa en vehículos?

5. ¿Cuál es la primera marca que viene a su mente cuando piensa en vehículos?

6. ¿Qué otras marcas de vehículos vienen a su mente?

6. ¿Qué otras marcas de vehículos vienen a su mente?

7. ¿Qué otras marcas de vehículos (Camionetas, SUV, automóviles, pickups / camionetas de platón) vienen a su mente?

7. ¿Qué otras marcas de vehículos (Camionetas, SUV, automóviles, pickups / camionetas de platón) vienen a su mente?

8. De las siguientes marcas de vehículos, ¿cuáles recuerda haber visto o escuchado?*

8. De las siguientes marcas de vehículos, ¿cuáles recuerda haber visto o escuchado?*

9. ¿Qué tanto conoce cada una de estas marcas de vehículos?*

Por favor responda sobre cada marca.

9. ¿Qué tanto conoce cada una de estas marcas de vehículos?*

Por favor responda sobre cada marca.

Nada Conocido
Algo conocido
Muy conocido
Chery
Changan
Deepal
BYD
Geely
Great Wall
Jetour
MG
Zeekr

10. ¿De qué marca de vehículos recuerda haber visto, escuchado o leído publicidad recientemente?*

10. ¿De qué marca de vehículos recuerda haber visto, escuchado o leído publicidad recientemente?*

11. ¿De qué otras marcas de vehículos ha visto publicidad?

11. ¿De qué otras marcas de vehículos ha visto publicidad?

12. ¿En qué lugar o medio recuerda haber visto, leído o escuchado sobre estas marcas?

Chery - Changan - Deepal - BYD - Geely - Great Wall - Jetour - MG - Zeekr

12. ¿En qué lugar o medio recuerda haber visto, leído o escuchado sobre estas marcas?

Chery - Changan - Deepal - BYD - Geely - Great Wall - Jetour - MG - Zeekr

13. ¿Qué tanta publicidad ha visto de cada marca?*

Por favor responda sobre cada marca.

13. ¿Qué tanta publicidad ha visto de cada marca?*

Por favor responda sobre cada marca.

Nada
Poca
Mucha
Chery
Changan
Deepal
BYD
Geely
Great Wall
Jetour
MG
Zeekr
14. ¿Qué tan familiarizado(a) está con estas marcas?

Chery*

Chery*

Changan*

Changan*

Deepal*

Deepal*

BYD*

BYD*

Geely*

Geely*

Great Wall*

Great Wall*

Jetour*

Jetour*

MG*

MG*

Zeekr*

Zeekr*

15. ¿Qué palabras o atributos asocia con estas marcas?

Chery

Chery

Changan

Changan

Deepal

Deepal

BYD

BYD

Geely

Geely

Great Wall

Great Wall

Jetour

Jetour

MG 

MG 

Zeekr

Zeekr

16. ¿Cuál es su percepción general de estas marcas?*

16. ¿Cuál es su percepción general de estas marcas?*

Negativa
Neutral
Positiva
Chery
Changan
Deepal
BYD
Geely
Great Wall
Jetour
MG
Zeekr

17. ¿Ha comprado vehículos de estas marcas anteriormente?*

17. ¿Ha comprado vehículos de estas marcas anteriormente?*

No
Chery
Changan
Deepal
BYD
Geely
Great Wall
Jetour
MG
Zeekr

18. ¿Qué tan probable es que compre un vehículo de estas marcas en el futuro?*

18. ¿Qué tan probable es que compre un vehículo de estas marcas en el futuro?*

Muy improbable
Algo probable
Muy probable
Chery
Changan
Deepal
BYD
Geely
Great Wall
Jetour
MG
Zeekr

Durante los últimos años se han realizado notables avances en el perfeccionamiento de las técnicas moleculares aplicables en las áreas de inmunología, diagnóstico y genética. La técnica de Reacción en cadena por la Polimerasa (PCR), ideada por K. Mullis en 1983, perfeccionada por Saiki (1985), White y Erlich en 1989, tiene grande importancia y ventajas en el diagnóstico de varias enfermedades virales como New Castle, Gumboro, Bronquitis, por protozoarios como Leishmania, Trypanosoma, Plasmodium y bacterianas como salmonellosis, mycoplasmosis, colibacilosis, tuberculosis, cólera, caracterizándose por ser una prueba de alta especificidad y sensibilidad en la detección de microorganismos patógenos.

La reacción de PCR consiste en el reconocimiento y la amplificación repetitiva de una fracción del Acido Desoxiribonucleico (ADN) utilizando sondas de nucleótidos. Estas sondas ya hibridizadas al ADN que se estudia, servirán como matrices en la producción de otras cadenas de ADN mediante la acción de una enzima la Polimerasa.

Una muestra que contenga el Acido Ribonucleico (ARN) de un virus se puede detectar mediante el PCR con la condición que el ARN sea transformado a un ADN para que la enzima pueda actuar. El resultado de la reacción se observa utilizando un proceso de electroforesis en gel de agarosa.

Básicamente la ejecución de la prueba se realiza usando una mezcla que contenga el ADN para amplificar y los componentes que se requieren para formar nuevas cadenas de ADN, un ciclador térmico para realizar los cambios de temperatura y ciclos de amplificación. Los elementos fundamentales para la realización de la prueba son:

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A. La muestra que contiene el ADN
B. el medio líquido tampon donde se produce la reacción que consta de Tris-acido clorhídrico, cloruro de potasio y cloruro de magnesio.
C. Deoxidonucleotidos trifosfato que se utilizan como eslabones para la producción de cadenas nuevas de ADN.
D. Una enzima Polimerasa con capacidad de termorresistencia como la Amplitaq y que tiene la propiedad de incorporar muchos nucleótidos al ADN.
E. Sondas de nucleotidos que se diseñan con base a secuencias de porciones del ADN que van a confirmar el genoma de un organismo determinado.

Todos estos componentes se mezclan en tubos de poliestireno y se someten a las temperaturas indicadas para la amplificación del ácido nucleico que se realizan en un ciclador térmico.

Primero se desnaturalizan y separan las cadenas complementarias del ADN, calentando la muestra a temperaturas de 94o a 98 o C durante 2 a 4 minutos, después se realiza la adhesión de las sondas a las cadenas complementarias del ADN a unas temperaturas entre los 37o a los 65oC con duración de 30 segundos a 2 minutos. Luego se extienden las sondas con la acción de la polimerasa a una temperatura de 72o a 75oC. Estos ciclos deben repetirse de 25 a 35 veces para lograr la amplificación matemática del ADN. Una vez obtenida la amplificación del ADN se pasa por un equipo de electroforesis que contiene un gel de agarosa al 2% con bromuro de etidio para exponerlo a radiación U.V.

Para que la prueba sea ejecutada correctamente se necesitan los siguientes parámetros: un balance perfecto de los componentes de la mezcla, el uso de adecuadas sondas de nucleotidos, una eficiente temperatura de templado y la cantidad exacta de la enzima polimerasa.

Una de las ventajas del PCR es la detección rápida y específica de los ácidos nucleicos de microorganismos patógenos en una muestra problema, con la característica de tener una alta especificidad y sensibilidad. La prueba permite una obtención rápida de resultados y se pueden examinar varias muestras en corto tiempo.

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Reacción en Cadena por la Polimerasa (PCR) - Volumen 24 No. 1